黄芩茎叶总黄酮对大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制的研究-药理学专业毕业论文.docxVIP

中文摘要黄芩茎叶总黄酮对大一心肌细胞氯化损伤 中文摘要 黄芩茎叶总黄酮对大一心肌细胞氯化损伤 的保护作用及其机制的研究 中文摘要 目的：现已有大量的动物实验和临床研究证明，在 心肌缺血／再灌注损伤中，产生大量的氧自山基，可引起 严重的心律失常、心肌顿抑及最严重的不n]．逆的心肌细 胞凋r：和坏死。由于认识到氧化应激是导致心肌缺吼／再 灌注损伤的重要病理生理机制之一，抗氧化已成为近年 研究心肌缺血／再灌注损伤治疗的热点。因此，小研究利 用外源性活性氧(H，O，、O一，)诱导的心肌细胞氧化损fjj 模型，从细胞水平上，观察r黄芩茎u-}总黄幽(SSTF) 对心肌细胞的保护作用，并初步探讨了黄芩筝叶总黄酮 抗心肌细胞氧化损伤的机制，为预防治疗缺向。陀心脏痫 的新药开发提供确切的实验与理论依据。 ，方法： 1．建立H：O：、0-2诱导的心肌细胞氧化损伤模型： 采用胰酶消化法分离培养Wistar大鼠乳鼠心肌细 胞，随机分为正常对照组、不同浓度的H，O，(0．1～ 1mmol／L)处理组，处理4小时：黄嘌呤(X)／黄嘌呤氧 化酶(XO)(O．2～2mmol／L)／(0．02～0．2U／m1)处理绀， 处理2小时。然后，检测心肌细胞培养液。fI乳酸脱氯酶 (LDH)活性，心肌细胞MTT代谢率及细胞存活率。 2．黄芩茎叶总黄胃对H：o：、o‘：诱导的心肌细胞氧化损 中文摘要伤的保护作用 中文摘要 伤的保护作用 将分离纯化的一c、肌细胞随机分为①正常对照组：② H，O，损伤组(H，O，终浓度0．5mmol／L)③x／xo损伤组 (X终浓度lmmol／L，XO终浓度0．1U／m1)④SSTF保 护组[SSTF终浓度(60mg／L；90mg／L：120mg／L)+H!O二 终浓度(0．5mmol／L)]⑤SSTF保护组[SSTF终浓』蔓 (60mg／L：90mg／L；120mg／L)+X／XO终浓艘(X lmmol／L， XO 0．1U／m1)]。(1)检测心肌细胞培养液LDH释放最、 心肌细胞MTT代谢率和损伤抑制率：(2)榆测心肌细胞 内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量： (3)琥珀酸脱氢酶(SDH)化学染色及透射【【i镜F进行 细胞形态学观察。 结果： 1、H：O：、0-2诱导心肌细胞氧化损伤模型 1 1 H，O，氧化损伤模型心肌细胞培养液r}l力u入H，O，作 j}j 4小时后，细胞受到损伤，与正常对照纰相比，H，O． 仡0．1～lmmol／L的范围内，心肌细胞释放LDH含砭El逐 渐增加(p0．01)。MTT代谢率及细胞存活率逐渐降低(P 0．01)。进一步实验证明在H，O，浓度为0．1～ 0．7mmol／L范围内，细胞LDH的释放量与H，0，浓度自 良好的线性关系。y=310．8+1072．6x r=0．997。在H，o， 浓度为0．1～lmmol／L范围内，细胞存活率与H，0，浓艘 仃良好的线性关系。y=0．988—0．573x r=0．996 1 2 O，氧化损伤模型心肌细胞培养液加入X／XO J冉．，卜 0，作用2小时后，细胞受到损伤，与正常埘照组相比， x／xo在x(0．2～2mmol／L)／xo(0．02～O．2U／m1)的拙M 一一 一一 !茎塑些 ～一一 内，心肌细胞释放LDH含量逐渐增加(P0．01)，MTT 代谢率及细胞存活率逐渐降低(P0．01)。进+步实验证： 明在X(0．2～1．4 mmol／L)／xo(0．02～O．14 U／m1)范 围内，细胞LDH的释放量与x／xo浓度有良好的线竹： 关系，y=353．17+411．9x r=O．995。在X(0．2～ 2ramoI／L)／xo(0．02～0．2U／m1)范围内，细胞存活率 与X／XO浓度有良好的线性关系。y=0．995—0．288x r=O．996。 与正常对照组比较，H，O，和X／XO处理纰LDH释 放量增加，表明外源性H：O。O：对心肌细胞膜具行损 伤作刚。而YTT代谢率及细胞存活率降低提，Jj外源7陀 H，o，、O．，对心肌细胞生长有抑制作用。 2．黄芩茎叶总黄酮对H：O。、O。：诱导的心肌细胞氧化损伤 的保护作用 2 1黄芩茎叶总黄酮对H202损伤的保护作用 加入H!O二 {I》{伤【大I素后，①与正常对照组比较，LDH释放最显著，十 高(P0．01)。正常对照组为31 7．60±5．59(U／100m1)、 损伤组为838．00±17．88(U／100m1)。 MTT代翊}率{II!箐 降低(P0．01)。正常对照组为0．657±0．049(A)、损 f，J}}I为0．515±0．046(A)。SOD活性{Iil著降低(P 0．01)，正常对照组为90．84±3．48(U／10％ells)、损伤