枯草芽孢杆菌防治番茄灰霉病及其作用机制与发酵水平研究-植物病理学专业毕业论文.docxVIP

摘要 摘要 本研究采用平板对峙法测定了供试的枯草芽孢杆菌(Baciflus subtilis)BS．208、 BS．209和Bs．2l及蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)BC一01对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑制作用。在温室条件下测定了它们对番茄灰霉病的保护作用和治疗作用， 并于2002年和2003年在田间条件下测定了BS．208和BS一209菌株制剂对番茄灰霉病 的防治效果。结果表明，枯草芽孢杆菌BS一208、BS一209和BS．21及蜡质芽孢杆菌BC一01 对番茄灰霉病菌的抑菌率分别为78．06％、82．49％、75．74％和73．84％；温室盆栽试验 表明只有BS．208和BS一209菌株对番茄灰霉病有较好的保护作用，两菌株发酵液和菌 体处理后24、48 h接种病菌，防效均达75％以上，好于0 h接种的防效，但无菌滤液 防治效果较差：BS．208和BS一209菌株的发酵液和无菌滤液对番茄灰霉病表现出较高 的治疗活性，BS一21和BC一叭菌株发酵液的治疗活性很低。两年的田问试验表明枯草 芽孢杆菌BS一208和Bs一209制剂对番茄灰霉病均具有良好的防治效果，并且防效随浓 度加大而提高，以800倍的防效最好，两菌株制剂800倍液连续三次施药后防效均达 到74％以上，并且BS一208菌株的防效略高于BS-209菌株。 通过对BS。208菌株与BS．209菌株生理生化特征的测定，结果表明两菌株的生理 生化特征基本上是一致的。对BS一208和BS一209菌株生长曲线测定，结果表明在PDB 液体培养基中BS．208和BS一209分别在培养24 h和28 h达到最高的生长量，都在48 h形成芽孢。通过测定化学药剂对两菌株生长影响，结果表明在烯唑醇、甲基托布津、 多菌灵、粉锈宁、多抗霉素、吡虫啉、辛硫磷、阿维菌素、高效氯氰菊酯和锐劲特田 问使用的最高浓度下，基本上不影响两菌株的生长和芽孢形成，而代森锰锌可以完全 抑制两菌株的生长。 采用生长速率法测定BS．208和BS一209菌株对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作 用，结果表明，BS一208菌株的无菌滤液对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制率为49．58％， 而BS一209菌株抑菌效果不好。用载玻片悬滴法测定两菌株的发酵液对番茄灰霉病菌 分生孢子萌发的抑制作用，结果表明，在稀释10倍的菌株发酵液处理后，BS一208和 BS一209的抑制率达到93．450／05口92．35％，且未见有附着胞形成，经两菌株发酵液原液 处理可以完全抑制孢子萌发。 在温室和田间条件下研究了BS一208和BS．209在番茄叶面和体内的定殖与传导。 通过针刺接种利福平标记的BS．208和BS一209菌株，24 h后就可在全株各个部位分 离到目的菌。在温室和田间条件下，BS一208菌株的定殖菌量分别为11 X 108-5．6X 108cfu／g鲜叶和15×109-0．02×108cfu]g鲜叶，BS一209菌株的定殖菌量分别为222X 106_55×106cfu／g鲜叶和205×106-0．48×106 cfu／g鲜叶；印象法观察发现BS一208和 BS一209菌株在叶片上都能定殖，但BS．208的定殖能力强于BS一209菌株；扫描电镜 观察表明，BS一208菌株在番茄叶面分布不均匀，大多定殖于伤口周围、叶面的凹陷 处和绒毛的根部。 通过测定与抗病性有关的酶活性结果表明，接种BS一208菌株发酵液48 h后 PAL、POD活性达到最大值，随后PPO在96h达到最大值。 对BS一208菌株的无菌滤液的酸碱稳定性、热稳定性进行了测试。结果表明， BS．208菌株的无菌滤液热稳定性较强，耐酸，在强碱性条件下不稳定。 BS．208菌株的无菌滤液热稳定性较强，耐酸，在强碱性条件下不稳定。 在摇瓶中对BS一208和BS，209的发酵培养基及发酵条件进行了筛选。结果表明， 所筛选到BS，208的理论最优培养基组合为氮源A4％，淀粉1．6％，酵母粉0．5％，理 论最优发酵条件组合为转速230 rpm，初始pH 8，接种量O．5％，装量70 m L(．500 mI_， 三角瓶中)，发酵周期为60 h；BS一209的理论最优培养基组合为氮源A3％，淀粉1．6％， 酵母粉0．5％，理论最优发酵条件组合为转速230 rprn，初始pH 8，接种量1％或3％， 装量50mL(500mL三角瓶中)，发酵周期为58h。 利用平板对峙法测定了BS．208和BS一209对19种植物病原真菌的抑菌作用。结 果表明，两菌株除对苹果轮纹病菌抑菌率较低为18．34％和10．18％以外，对所测定的 其余1 8种植物病原真菌都有较高的抑制作用。 关键词：枯草芽孢杆菌；番茄灰霉病；生物防治；发酵；作用机制 Study Study A