第八章氨基酸代谢.DOC

第十章 DNA的生物合成 本科六版 PAGE 1 - PAGE 1 - 第十章 DNA的生物合成 一、基因（gene） 1868年瑞士外科医生Miescher从脓细胞中分离到核酸， 1909 Johannsen首先提出用基因代表遗传物质。而关于基因的本质直至五十年代后才得以逐渐揭示。 定义：DNA分子上编码生物活性产物的功能片段。 这些生物活性产物包括蛋白质和RNA。 二、中心法则（the central dogma of molecular biology） DNA上的 基因只是一种信息，这种信息只有表达出来才有意义。在生物体内基因表达的具体方式主要是蛋白质。 1、1958年Crick基于诸多室验依据提出生物体内遗传信息表达的基本规律——中心法则： 转录 翻译 复制 DNA RNA 蛋白质 逆转录 1970年H.Temin发现了逆转录现象，使中心法则得以扩充。 2、复制（replication）：以DNA为模板合成DNA的过程。其本质是将遗传信息由亲代准确地传给子代的过程。 3、转录（transcription）：以DNA 如模板合成RNA 的过程，即将遗信息由DNA传给RNA 的过程。 4、翻译（translation）：以RNA的模板合成蛋白质的过程，即将遗传信息由RNA传给蛋白质的过程。 5、基因表达（gene expression）：指遗传信息由DNA经RNA最终表达为蛋白质的过程。包括转录、翻译两个步骤。 6、逆转录（Reverse transcription）以RNA为模板合成DNA的过程。即将遗信息由RNA逆向传给DNA的过程。其遗传信息传递方向与转录相反。故名逆转录。 本篇以中心法则为主线索，着重阐述遗传信息传递的基本规律（复制、转录、翻译）。在此基础上，介绍基因表达的调控和分子生物学的新技术。 DNA的生物合成包括复制和逆转录，复制为大多数生物所共有，而逆转录只存在于个别生物体中，故本章着重讲述与复制相关的内容。 第一节 复制的方式——半保留复制 当细胞分裂时，DNA即开始复制，其主要特征为半保留复制（semi-conservative replication）。 一、半保留复制的定义：DNA的两条链均可作为模板，合成出子代DNA与母代完全相同，且一条链来自母链，一条链是新合成的，这种复制方式称为 Semi-conservative replication 二、半保留复制的实验依据：1953年Watson和Cmick在提出双螺旋模型时即已推测出复制方式。1958年M.Messelson和F.W.Stahl用实验加以证实。 实验方法见P221图11-1 三、半保留复制的意义：由于DNA分子中两股链有碱基互补关系，一条链即可确定其互补链的碱基序列。按半保留复制的方式，子代保留了亲代的全部遗传信息，通过基因表达，决定了子代生物的特性和类型。故半保留复制的意义为：保持了代与代之间DNA序列的一致性，体现了遗传过程的相对保守性。 第二节 参与复制的酶 参与复制大分子物质有： 1、底物（substrate）：dNTP(N：A、T、C、G) 2、模板(template)：母代DNA的两条单链。 3、引物(primer)：为一有3’— 4、酶和蛋白：包括聚合酶、解链解旋酶、引物酶、连接酶等。 一、DNA聚合酶 全称为DNA dependent DNA polymerese（DDDP），1958年A.Kornberg在大肠杆菌中发现了polⅠ，并在试管内证明了其聚合酶活性. (一）DDDP催化的反应 较清楚的是原核生物的DDDP。 1、5’—3 以母链为模板，按碱基互补规律，DDDP 在引物3’—OH上逐个加上dNTP使新链延长，见P223反应式为（dNMP）n+dNTP (dNMP)n+1+PPi DDDP的聚合方向只能是5’—3 2、核酸外切酶（exonucleasae）活性：表现为3’-5’外切酶和5’ (二）种类 1、原核生物的DNA聚合酶： E.coli中有PolⅠ、PolⅡ和polⅢ，三者在细胞中的分子数之比为400：40：20，但活性polⅢ是PolⅠ的10倍以上，故认为polⅢ是复制中起主要作用的酶。 polⅢ的分子量约140KD，由10种亚基组成不对称的二聚体（图11-5A），有聚合酶和3’-5’外切酶活性，每分钟催化约105个核苷酸聚合。其中α、ε、θ组成核心酶，α亚基有5’-3’ 聚合酶活性，ε亚基有3’ PolⅠ的分子量约为1