马蹄莲、石斛和姜凝集素基因的克隆及分析-遗传学专业毕业论文.docxVIP

博士指导小组成员名单唐克轩教授 博士指导小组成员名单 唐克轩教授 沈大棱教授 杨金水教授 复旦人学博，I：学位论义摘要 复旦人学博，I：学位论义 摘要 凝集素是一类含有至少一个非催化结构域并能可逆结合到特异单糖或寡糖上的 蛋白质。单子叶植物甘露糖结合型凝集素(monocot mannose—binding agglutinins) 是其中比较大的一个家族，其中以雪花莲凝集素为代表的一个亚类显示出良好的抗同 翅日昆虫活性，以天麻抗真菌蛋白为代表的另一亚类则具有突出的抗真菌活性，它们 在植物抗虫和抗病基因工程中均具有很大的应用潜力。 为了挖掘更多更有效的抗病、抗虫基因，本文对植物凝集素基因进行研究，以马 蹄莲、石斛和姜为材料，利用RACE-PCR技术，成功地从中克隆出了凝集素基因，并 对其功能进行了研究，得到如下结果： 1． 首次从天南星科植物马蹄莲。p克隆了马蹄莲凝集素基因嬲以zaa的全长cDNA为 87Ibp，含有一个417bp的丌放阅读框，编码一个出138个氨基酸组成的前体蛋白。 对ZAA和其他单子叶甘露糖结合凝集素的序列同源性进行了比较，并发现zaa是 一个多基凼家族编码的。半定量RT—PCR表明朋a在马蹄莲植物的各个部位都有 表达，其中在叶柄中的表达量最高。 2． 克隆了马蹄莲凝集素基囚的包含启动子区、终止予区和全长基因组序列，并对其 启动子区基本活性元件和抗病相关的元件以及其它的元件进行了预测。启动子区 具有核心启动子，终止子富含A+T序列，形成发夹结构，具备终ll二子的特征。 3． 构建了嬲矗基因的植物表达载体oCAMBIM304一z船并导入到根癌农杆菌EHAl05 中，对烟草进行了转化。 4． 从兰科植物铁皮石斛中克隆了石斛凝集素基因doal和doa2,doal的全长cDNA 为768bp，含有一个498bp的丌放阅读框，编码165个氨基酸：doa2的全长cDNA 为777bp，含有一个513bp的开放阅读框，编码170个氨基酸。 5． 曲‘次从姜科{血物姜·It兜隆了姜凝集岽基因zD“，姜凝集索丛Ⅲ的全妖为768bp， 含有一个510bp的丌放阅读框，编码169个氨基酸。分析表明，姜凝集素属于单 子叶甘露糖结合的凝集素，该研究不仅把这一家族凝集素(甘露糖结合凝集素) 延伸到了姜科，而且有助于进一步研究凝集素的进化关系。 6． 分别构建了含ahn(天南星凝集素)、如韶初z∞基因的原核表达载体，并成功 地实现了这三个基因在^：coli巾的表达，并对其重组的蛋白进行了纯化。从植 物中提取了天然的AlIA和ZOA，作为对照进行了凝JIn活性实验。结果表明重组斛IA 和ZOA具有和天然蛋白一样的凝血活性。抑菌实验表明，重组DOA2和ZOA能明 显抑制小麦赤霉病菌的生长。 马蹄莲、石斛和姜凝集素基因的克隆为深入研究其抗病虫害功能打下了基础，该 研究刈获得更多具有自主知识产权的功能基因、为利用基因工程技术改良农作物抗病 复丑人学博．1．学位论义虫性具有潜在的重要意义。 复丑人学博．1．学位论义 虫性具有潜在的重要意义。 关键词：马蹄莲凝集素(Zantedeschia aethiopica agglutinill，ZAA)，石斛凝集素 (Dendrobium officinale agglutinin，DOA)．姜凝集素(Zingiberoffj_cinale agglutinin， ZOA)。RACE，重组蛋白，凝血活性分析，抑菌分析，遗传转化 复咀人学博。J’学位论文Abstract 复咀人学博。J’学位论文 Abstract Agglutinins are proteias possessing at 1east one noncatalytic domain， which binds reversib】Y to specifi C mono—or oligo—saccharides．Among them a subfamily represented by Galanthus nivahsagglutinin(GNA)iS characterized with effective resistance activity against Homopteran insects，while another subfami ly represented by gastrodianin iS more effective against pathogenic f．ungi，with both 0f the subfamil Y showing great potential application in plant teni stance improvement against insects or fungal patho