抗草甘膦（EPSPs）基因及柠檬酸合酶（CS）基因对水稻的遗传转化-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否鳔密 否 如需保密，解密时间 年 月 日 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 丧或撰写兰的研究成果，‘也不包含为获得华中农业大学或其他教育讥构的学位或证蒂 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作曲同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意． 研究生签名：救削华 时问：2积年-月-爹日 学位论文作者签名：龆割竿导师签名：善}一夺 签名日期：z叮‘年f月I习日． 签名日期：知d‘年 f A fg日 注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之闯 中文摘要水稻是最重要的粮食作物，是世界近一半人口的主粮。杂草危害是造成水稻减 中文摘要 水稻是最重要的粮食作物，是世界近一半人口的主粮。杂草危害是造成水稻减 产的主要原因之一．通过除草剂来控制杂草己成为现代化农业不可缺少的一部分， 但除草剂在消灭杂草的同时也对作物产生了伤害作用。 磷是生命的必需元素之一，在作物的生长发育中起着重要的作用．然而土壤有 效磷的缺乏是全世界范围所面l临的共同问题。 已有的研究表明植物通过分泌柠檬酸活化土壤中难溶性无机磷从而提高了土壤 磷的可利用性，草甘瞵通过抑制植物的5-烯醇式丙酮酰莽草酸．3．磷酸合酶 (EPSPs)，非选择性的杀灭杂草和作物，：本研究通过根癌农杆菌介导法，将本研究 室人工改造合成的抗除草剂草甘膦(剧碱，)基因和来源于假单胞杆菌的柠檬酸合，： 酶(cs)基因分别导入粳稻品种中花’ll和优良籼型恢复系明恢86中，使该品种’： 获得抗除草剂性能，以及改善其低磷敏感性能．其主要研究结果如下： 警 l通过磷梯度试验，确定明恢86、93．1l、珍汕97和明恢63四个釉稻品种 磷营养缺乏的最佳筛选浓度为30-60 mg／kg，并确定明恢86为磷敏感品种． 2通过草甘膦敏感性试验，确定了粳稻品种中花11在愈伤组织水平对草甘膦 的筛选浓度600 mg／L，可将其作为其他水稻品种抗性筛选的依据。 萼 3通过根癌农杆菌介导法，将本研究室人工合成的抗除草荆草甘瞵(EPSPs) 一? 基因转化粳稻品种中花ll的愈伤组织，得到138株再生植株，PCR检测结果显 示其中87株能扩增出特异目标条带，Southern结果也说明外源基因已整合到受体 基因组中。再生植株(To)用除草剂农达涂抹叶片正反面进行鉴定，转基因阳性植 株相对于非转基因植株表现出草甘膦抗性；同时将T0代收获的部分种子(TI)种 植于温室，在苗期喷施除草剂农达，发现转基因植株后代对除草剂的抗性有分离． 4通过根癌农杆菌介导法，将抗除草剂草甘瞵(EPSPs)基因和柠檬酸合酶(cs) 基因同时转化籼稻优良恢复系明恢86的愈伤组织，共获得48株To再生植株； 经PCR检测，其中22株为转基因阳性植株；对阳性转基因植株的Southern及 Northern分析表明，外源基因CS已整合到了水稻基因组中并得以有效表达；用除 草剂农达对转基因植株To代进行草甘膦抗性检测，转基因阳性植株表现出草甘膦：； 抗性；对获得的单拷贝转基因单株的．To代的种子(TI)进行草甘膦抗性发芽试验， ’? 结果表明，全部遵循孟德尔显性遗传规律．由此表明单拷贝转基因植株将外源基因 结果表明，全部遵循孟德尔显性遗传规律．由此表明单拷贝转基因植株将外源基因 ． 稳定遗传给后代并表达． 关键词水稻，转化，EPSPs，柠檬酸合酶(CS)基因，分子生物学分析 2 ABSTRACTRice ABSTRACT Rice is one of the most important crops，and the staple food for about half of people in the world．Weed damage is one of the major causes of yield losses．It is indispensable to modernized agriculture to control weed by using herbicide，However,herbicide also injures crops while killing weeds． Phosphorus(P)is a necessary maeronutrient for plant growth and development, which plays an important role in plant photosynthesis，respiration and all the