马尾松树皮提取物诱导三种癌细胞凋亡的细胞与分子机理研究-遗传学专业毕业论文.docxVIP

帧斐 帧斐 中山大学硕士学位论文 马尾松树皮提取物诱导‘种癌细胞稠L的细胞与分子机理研究 马尾松树皮提取物诱导三种癌细胞凋亡的细胞与分子机理研究 遗传学 硕士生：赖斐 指导老师：王金发 摘要 松树皮提取物是一种多酚类混合物。多个研究表明该混合物在体外和体内 均具有强大的抗氧化作用，对循环系统、免疫系统、神经系统和生殖系统方面的 疾病具有预防和治疗作用。本研究以癌细胞凋亡为切入点，在体外以人乳腺腺癌 MCF．7，宫颈癌Hela和卵巢癌H08910细胞系为对象．对中国马尾松(Pinus massoniana)树皮提取物PMBE诱导癌细胞凋亡的细胞和分子机理作了由浅入深 的研究。通过细胞生物学手段，本研究证实PMBE在O～120,ug／ml的剂量范围 内和在0～72h连续作用时间内对上述三种癌细胞有剂量和时间相关的生长抑制 活性，并通过DAPI荧光显微分析证明PMBE对癌细胞具有诱导凋亡的作用，该 作用可以通过TUNEL实验加以证实。通过电子显微镜的亚细胞水平分析，PMBE 诱导的癌细胞凋亡事件发生部位位于线粒体，免疫印迹获得的证据表明凋亡细胞 中Procaspase一9被激活，正常状态下位于线粒体膜内腔的细胞色素c被释放到细 胞质。同时，无血清状态下的相同研究表明，处于血清饥饿状态下的癌细胞对 PMBE毒性的敏感性有明显的增强。另外，本研究发现在PMBE触发的癌细胞 凋亡事件中，基质酶基因MT-SPl及其蛋白抑制剂HAI．1基因的mRNA水平表 达被下调，推测这种调控是通过PMBE或与PMBE有潜在作用的未知因子在凋 亡事件中通过作用到两基因的LDL受体结构域上而实现的。本研究为实现PMBE 在预防和治疗癌症上的药用价值提供了细胞学和分子生物学的理论基础。 关键词：松树皮提取物；凋亡；癌症；抗氧化；免疫印迹 桢斐 桢斐 中山大学硕士学位论文 马尾松树皮提取物诱导三种癌细胞凋亡的细胞与分子机理讲究 The Mechanism Studies of the Apoptosis Event in Three Cancer Cell Lines Triggered by a Pine Bark Extract From a Chinese Masson Pine (Pinus massoniana) Genetices Name：LAI Fei Supervisor：WANG Jin—fa ABSTRACT Pine bark extract is mixture of polyphenol，whose in vitro and／n vivo antioxidant properties have been widely confimaed．It has been reported that this mixture exerts effect in prevention and therapy in cardiovascular，immunological，nerve and reproductive diseases，In the current research，cell models made up of human breast eelIline MCF-7，cervical cancer cell line Hela and ovarian eel【line H089 10 were built in vitro tO study the eellular and molecular mechanism of the apoptosis event triggered by bark extract from Chinese masson pine tree(Pinus massoniana)．Via tools of cell biology，the PMBE was found tO exert cell growth inhibition in dose and time—dependent manner in 0—120}_tg／ml within 0-72h． PMBE—treated cells dyed with DAPI showed typical apoptotic mol’phology, which was further confirmed by TUNEL assays．Under the TEM，mitochondria with disruptive double—layer membrane in PMBE—treated cancer ceils was widely found， indicating the apoptosis event was involved with mi