霉酚酸酯与地塞米松对SLE疗效作用的体外实验研究-免疫学专业毕业论文.docxVIP

南京医科人学倾{学位论叟霉酚酸酯与地塞米松对SLE疗效作用的体外实验研究 南京医科人学倾{学位论叟 霉酚酸酯与地塞米松对SLE疗效作用的体外实验研究 中文摘要 本实验以系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)．惑 者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells．PBMCs)为 对象，应用流式细胞术及ELISA法，在体外细胞细胞培养体系中，通 过与地塞米松相对照，分别从细胞及分子水平探讨了新型免疫抑制剂 霉酚酸酯(mycophenolate mofetil，MMF)对SLE患者炎性细胞释放、 Th细胞亚群比例改变及PBMCs凋亡的作用，以分析MMF对SLE 疗效作用的特点和机理。首先，分离SLE患者的PBMCs，分别加 MPA(mycophenolic acid，为MMF在体内的活性形式)或地塞米松 (dexamethasone，DEX)刺激培养，用ABC—ELISA法检测培养上清中 IL一10、IL．12、IFN-7、sFas及sFasL的水平，用三色流式细胞术检测 培养细胞中CD4+IFN．Y+IL．10一T细胞、CD4+IFN—v IL一10+T细胞及 CD4+IFN．Y+IL．10+T细胞百分率，并用AV-FITC／PI双标记法检测 PBMCs的凋亡百分率。结果显示：1)SLE患者PBMCs培养上清中 IL．10、1L．12及IFN一1，水平较正常对照显著升高，MPA可使此三细胞 因子的分泌显著降低；而DEX却使IL．10分泌水平增高，但对IL一12、 IFN一7水平无显著影响。2)SLE患者的PBMCs培养中CD4+IFN—v IL一10+T细胞亚群和CD4+IFN．v+IL．10+T细胞亚群百分率显著增高， 而MPA可导致用或未用PHA刺激培养的PBMCs中CD4+IFN—v +IL一10 T细胞、CD4+IFN—v 1L一10+T细胞及CD4+IFN．Y+IL一10+T细 胞阳性率下降，尤其是可使SLE异常升高的CD4+IFN—v IL一10+T细 胞亚群和CD4+IFN．Y+IL．10+T细胞亚群百分率显著降低；而DEX在 使CD4+IFN—v+IL．10 T细胞亚群的比例降低的同时，却使CD4+IFN— v—IL．104 T细胞亚群比例增高。3)SLE患者PBMCs培养上清中的 sFasL水平较正常对照显著增高，而MPA及DEX均可使其分泌的sFas 及sFasL水平显著下降；但MPA对分泌sFasL的抑制作用较DEX更 明显，而DEX对抑制sFas分泌的作用较MPA更明显。4)SLE患者 培养的PBMCs凋亡率较正常对照显著增高，MPA及DEX均可使凋 亡率进一步增加，而DEX较MPA对凋亡的诱导作用更加显著。上述 结果提示，MPA治疗SLE的疗效作用可能与抑制IL一10、IL一12、IFN—v 结果提示，MPA治疗SLE的疗效作用可能与抑制IL一10、IL一12、IFN—v 等炎性细胞因子的异常释放，抑制CD4+IFN—V+IL．10一T细胞、 CD4+IFN—Y IL一1 0+T细胞及CD4+IFN．Y+IL一1 0 4T细胞亚群的活化增 殖以及诱导PBMCs凋亡有关。DEX除同样可使SLE患者PBMCs培 养中CD4+IFN．Y+IL．10一T细胞亚群(Thl)比例降低及凋亡增加外， 与MPA的作用尚存有差异：DEX使IL一10的分泌增加，并使CD4一IFN— Y+IL一10+T细胞亚群比例升高；DEX诱导SLE PBMCs凋亡的程度较 MPA更显著。MPA与DEX均能抑制sFas、sFasL的水平，提示MPA 与DEX的诱导PBMCs凋亡的机制可能不是通过Fas．FasL途径。因 为，一般情况下，Fas／FasL高表达时，往往伴随sFas／sFasL水平增高。， 但sFas、sFasL的作用不同，sFasL能够作用于膜Fas，诱导凋亡；而 sFas则能与sFasL或膜FasL结合，抑制凋亡。故DEX对sFas分泌 的抑制作用较为明显，与其显著地凋亡诱导作用是相一致的。总之， MPA及DEX对SLE患者Th亚群及PBMCs凋亡的作用既有相同， 又存在差异，从而为临床上联合应用二药以达到优势互补，从而更好 地发挥对SLE的治疗作用提供实验室依据，也为设计更好的SLE治 疗方案提供参考。 【关键词】 系统性红斑狼疮(SLE)；霉酚酸酯(MMF)；霉酚酸 (MPA)；地塞米松(DEX)；Th细胞亚群；凋亡；sFas； sFasL；流式细胞术 2 ——一 ——一 塑皇l至型查堂塑±兰堡堡兰 In vitro Study：Effect of Mycophenolate Mofetil and Dexa