慢性支气管炎肺气虚证血瘀状态及补气祛瘀法的作用机理研究-中西医结合临床专业毕业论文.docxVIP

中文摘要慢性支气管炎肺气虚证血瘀状态 中文摘要 慢性支气管炎肺气虚证血瘀状态 及补气祛瘀法的作用机理研究 摘 要 目的：本研究旨在通过对实验性慢性支气管炎肺气虚证 大鼠血液及肺组织中内皮素(ET．I)、一氧化氮(NO)、 血栓素(TXB2)、6-酮．前列腺素(6-Keto-PGFl。)等指标 的检测分析，并运用免疫组化染色观察其支气管及肺组织中 血管内皮生长因子(VEGF)的表达特征，从微观角度探讨 慢支肺气虚证血瘀状态，进一步揭示其证候本质，并以补气 祛瘀中药与传统补益肺气方药进行治疗干预，探讨其作用机 制，从而为临床治疗提供实验依据。 方法：实验前l周将50只清洁级SD大鼠置于实验环 境中喂养，室温20℃～25℃。将动物随机分为正常对照组 (简称“正常组”)10只，造模组40只，雌雄各半。造模 组采用改良烟熏法复制慢支肺气虚证动物模型。将造模大鼠 置于特制的lm×lm×lm烟室中，用刨花、锯末、烟叶各 509，点燃熏烟，每日2次，每次30分钟，持续30天。正 常组则置于正常无烟环境中饲养。分别在l、8、15、22、 30天监测体重，每日观察记录其一般状态。模型复制成功 后，将造模组大鼠随机分为模型对照组(简称“模型 组”)、补气祛瘀高剂量组(简称“高剂量组”)、补气祛 瘀低剂量组(简称“低剂量组”)、补气组(阳性对照药 组，简称“补气组”)4组，每组10只，雌雄各半。 中文摘要5组均于造模结束后第2天起连续灌胃生理盐水或药物 中文摘要 5组均于造模结束后第2天起连续灌胃生理盐水或药物 21天。正常组：灌胃生理盐水10ml／kg，每日1次；模型 组：灌胃生理盐水10ml／kg，每日1次：高剂量组：每日用 药剂量为15．69／kg(相当于临床成人用药量的14倍)，每 日1次灌胃；低剂量组：每日用药剂量为7．89／kg(相当于 临床成人用药量的7倍)，每日1次灌胃。补气组：每日用 药剂量为79／kg(相当于临床成人用药量的7倍)，每日1 次灌胃。 于灌胃结束后第2天，断头取血，立即以4℃3500r／min 离心5min，分离血浆，并取血清，．20℃冻存待检。取左肺 组织制成10％的肺组织匀浆(将肺组织用冰生理盐水冲 洗，滤纸吸湿后，称取湿重O．39左右，加入预冷的生理盐 水，用电动匀浆器研磨)，4。C6000r／min离心5min，提取 上清液，用双缩脲法测定蛋白含量，．20。C冻存待检。取右 侧肺脏中部组织o．5cm×O．5cm，用10％甲醛(pH7．4磷酸 盐缓冲液配制)固定，常规石蜡包埋，切片，用于免疫组 化染色。 采用放免法测定大鼠血浆和肺组织中ET．1、TXB，、6． Keto．PGFI。含量，采用硝酸还原酶法测定血清和肺组织中 NO含量。采用sP免疫组织化学染色方法，观察支气管及 肺组织中VEGF的表达情况。 结果 1一般状态观察 造模组大鼠于烟熏后第12天开始，出现咳嗽、痰鸣、 皮毛失去光泽，倦怠，活动减少，并呈现出毛枯体瘦，口 鼻中有质地清稀的分泌物流出，肛门未见粘液或稀便附 中文摘要着，粪便质地无明显变化。正常组则未见明显异常。与正 中文摘要 着，粪便质地无明显变化。正常组则未见明显异常。与正 常组相比，造模组体重增长较为缓慢。以造模30天时体重 的增幅比较，造模组增加(26．92±7．35)g，正常组增加 (46．21±5．09)g，两组体重变化有明显差异(PO．0I)。 负重游泳实验结果表明，正常组游泳时间为(4．02± 0．35)rain，造模组为(2．02±O．55)min，两组相比有显著 性差异(PO．01)。 2各组大鼠血液及肺组织中ET．1、NO、TXB2、6-Keto— PGFl。的变化 2．1各组大鼠血液及肺组织中ET-l和NO的含量 2．1．1各组大鼠血浆及肺组织中ET．1的含量 结果显示，模型组大鼠血浆、肺组织中ET．1含量 (223．49±20．48，14．92±3．14)均较正常组(t31．19± 12．21，7．34±1．82)明显升高(P0．01)；经用药干预，高 剂量组(163．234-30．90，9．59±2．27)、低剂量组(168．91 ±24．95，10．52±2．17)、补气组(200．54±22．76，12．74± 1．71)与模型组相比均有明显的降低(P0．05或 P0．01)；高剂量组、低剂量组血浆和肺组织中ET．1的含 量明显低于补气组(Po．01)，但高、低剂量组相比无显 著性差异(尸O．05)。 2．1．2各组大鼠血清及肺组织中NO的含量 结果显示，模型组大鼠血清及肺组织中NO含量 (21．88±3．68，0．13±0．02)较正常组(39．89±4．99，0．23 ±O．02)明显降低(P0．01)；经用药干预，高剂量组 (34．38--4-5。71，0。