慢性复合应激对学习与记忆的影响及NMDA受体在其发生机制中的作用-人体解剖学和组织胚胎学专业毕业论文.docxVIP

华中科技大学同济医学院硕士学位论文慢性复合应激对学习与记忆的影响及NMDA受体 华中科技大学同济医学院硕士学位论文 慢性复合应激对学习与记忆的影响及NMDA受体 在其发生机制中的作用 硕士研究生： 程少容 导 师：刘能保教授 华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室， 武汉430030 中文摘要 现代社会竞争激烈，工作压力大，生活节奏快，诸多社会因素使得 人们处于各种各样的应激状态。应激是机体受到强烈刺激或有害刺激以 后产生的非特异性适应反应，其主要特征是下丘脑．垂体．肾上腺(HPA) 轴被激活，导致血浆糖皮质激素升高。应激对认知功能的影响是一个热 门话题，而学习与记忆是脑的高级神经生理活动，它是认知活动中的重 要方面。研究发现，适度应激刺激有助于学习与记忆，长期或强烈刺激 则损害学习与记忆。谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统(CNS)内含量最多 的一种兴奋性氨基酸(EAA)，NMDA受体作为其中的一种离子型谷氨酸 受体，不仅参与兴奋性突触传递，而且与突触可塑性、长时程增强效应 (Long．term potentiafioIl，LTP)、学习与记忆的形成密切相关。NMDA受 体(NR)大量分布于海马，参与学习与记忆。分子生物学的研究证实 NMDA受体分为NRl、NR2和NR3亚基，其中NR2又由NR2A、NR2B、 NR2C和NR2D亚基组成，近来的研究表明NMDA受体是由4～5种亚 基组成复合体发挥作用，天然NMDA受体是由NRl和NR2组成的异寡 聚体，NRl是NMDA受体基本的功能亚单位，NR2是调节亚单位，NR2 参与NMDA受体的组成并修饰其功能，不同NR2的参与可赋予NMDA 华中科技大学同济医学院硕士学位论文受体以不同的电生理和药理学特性。海马是参与学习与记忆功能的重要 华中科技大学同济医学院硕士学位论文 受体以不同的电生理和药理学特性。海马是参与学习与记忆功能的重要 脑区，本实验拟用慢性复合应激大鼠模型、原代培养海马神经元和免疫 组织化学结合图像分析方法，观察在体和离体海马神经元NMDA受体 免疫反应性的变化，来探讨慢性复合应激影响学习与记忆的神经机制。 本实验分两部分： 第一部分将成年雄性Wistar大鼠分为实验组和对照组，实验组动物 每天交替暴露于复合应激原(睡眠剥夺、垂直旋转、噪音刺激和持续光 照)环境中达6周。对照组动物只平行地接受常规喂养。两组动物于实 验组动物开始接受复合应激处理程序之前用Morris水迷宫测试其空间学 习与记忆成绩，在实验组动物完成复合应激处理程序之后先后用Moms 水迷宫和Y迷宫，检测大鼠的学习记忆成绩。再采用免疫组织化学和图 像处理方法分析海马CAl、CA3、齿状回区NRI、NR2A、NR2B的表 达。结果为(1)Morris水迷宫测试中，慢性复合应激组大鼠寻找平台的 潜伏期较对照组明显缩短：Y迷宫测试中，慢性复合应激组大鼠学会躲 避电击的正确次数较对照组明显增多。(2)慢性复合应激组海马内 NMDA受体亚基NRl、NR2B表达水平较对照组明显上调，NR2A表达 水平无显著变化。 第二部分以体外原代培养的大鼠海马神经元为研究对象，在培养达 10d时，将维持液全部吸出，用DMEM液洗涤细胞2次，加入终浓度为 lO-Tmmol／L(10‘7)，106mmol／L(10-6)，10-Srmmo (10。5)的皮质酮 (corticosterone，CORT)。为了探讨CORT对原代培养海马神经元的作用 机制，在加CORT之前1 5min，分别加入25mmol／L的葡萄糖及NMDA 受体拮抗剂MK801，这样共分为8个组：对照组、104组、10。6组、10。5 组、10。6+highglucose组、lO。5+highglucose组、10《+MKS01组及10‘5 +MKS01组。继续培养48h后，在倒置显微镜(Olympus Bx51)下观察 华中科技大学同济医学院硕士学位论文细胞形态。一部分进行神经元存活率的测定；另一部分采用免疫细胞化 华中科技大学同济医学院硕士学位论文 细胞形态。一部分进行神经元存活率的测定；另一部分采用免疫细胞化 学技术和图像分析方法检测体外培养的海马神经元在加不同剂量的 CORT以后NMDA受体免疫反应性的变化。结果为：(1)10。‘7浓度组对 海马神经元损伤不明显，而10‘6和10‘5浓度组与对照组相比，可剂量依 赖地损伤原代培养的海马神经元，CORT浓度越高，海马神经元的存活 率越低，即神经元死亡率越高。(2)在lO‘6和10巧浓度CORT作用下， NMDA受体亚基NRl、NR2A和NR2B表达较对照组明显降低。 总而言之，慢性应激可引起血浆糖皮质激素浓度的升高，继而影响 学习与记忆，三者之间存在着密切的关联。 关键词慢性复合应激；空间学习和记