黄芩茎叶总黄酮对同型半胱氨酸致平滑肌细胞增殖的抑制作用-生物化学与分子生物学专业毕业论文.docxVIP

英文缩写符号汇编 英文缩写符号汇编 HCY同型半胱氨酸 AS 动脉粥样硬化 TF 黄芩茎叶总黄酮 SMC 平滑肌细胞 ASMC动脉平滑肌细胞 FCS 胎牛血清 中文摘要黄芩茎叶总黄酮对同型半胱氨酸致 中文摘要 黄芩茎叶总黄酮对同型半胱氨酸致 平滑肌细胞增殖的抑制作用 摘 要 目的：(近年来的国内外研究表明，高同型半胱氨酸 (HCY)血症是导致动脉粥样硬化(AS)发生的独立危 险因素。HCY可以促进平滑肌细胞增殖和内皮细胞损 伤，促进血小板黏附和血栓的形成，导致AS的形成。 平滑肌细胞增殖是AS形成过程中的中心环节，HCY在 这一过程中有明显作用。 流行病学调查资料表明，黄酮的摄入量与动脉粥样 硬化性疾病的发病率、死亡率呈显著性负相关，大量实 验也证实，黄酮具有降血脂、减小动脉粥样硬化斑块面 积的作用。我国有丰富的黄芩资源，己知黄芩茎叶总黄 酮(TF)为黄芩茎叶的主要有效成分。寺体研究用细胞记 数、MTT比色分析、流式细胞仪对细胞周期的测定及透 射电镜下观察细胞超微结构的改变等方法，以离体培养 的大鼠动脉平滑肌细胞(ASMCs)为研究对象，检测TF 对由同型半胱氨酸刺激的动脉平滑肌细胞的增殖是否具 有抑制作用。为动脉粥样硬化性疾病的防治及TF的开发 利用提供坚实的理论依据。 f方法：本实验用Wistar-kyoto(WKY)大鼠的动脉平滑 肌细胞作原代及传代培养，培养方法为传统的贴块培养 法。实验用3．8代的传代细胞。用含0．4％胎牛血清(FCS) 中文摘要的DMEM培养液抑制细胞，使之同步化，用流式细胞仪 中文摘要 的DMEM培养液抑制细胞，使之同步化，用流式细胞仪 检测同步化程度。 1．检测不同浓度的同型半胱氨酸对培养的ASMCs增殖 的影响，选择刺激浓度：将细胞接种于96孔板，待长至次 融合状态时，使之同步化，之后进行分组，以含0．4％FCS 的DMEM为对照组，以含不同浓度HCY的DMEM作为 实验组，加药后作用48小时，进行MTT比色分析。 2．检测不同浓度的TF对HCY刺激的平滑肌细胞增殖的 抑制作用，选择抑制浓度：将细胞接种于96孔板，待细胞 长至次融合状态时，使之同步化，之后进行分组，以含 0．4％FCS的DMEM培养细胞为对照组，以含0．2mmol／L HCY的DMEM培养细胞作为HCY组，在此基础上，以含 不同浓度TF的DMEM培养细胞为实验组，作用48小时 后，进行MTT比色分析。 3．不同时间下HCY及TF对大鼠ASMCs的作用，选择 作用时间：为测定不同时间下HCY及TF对ASMCs的作 用将ASMC S分成三组：对照组；HCY组，HCY终浓 度为0．2mmol／L；TF组，TF终浓度为1001xg／ml，于加药后 的第1、2、3天分别作MTT比色分析。选择最佳作用时 间。 4．TF对由HCY刺激的大鼠ASMCs增殖的抑制作用： 实验分为对照组，HCY组和TF组(药物浓度同上)， 作用48小时后，进行细胞记数、MTT比色测定及细胞 周期分析，并在透射电镜下观察细胞超微结构的改变。 结果： 1．HCY可促进大鼠ASMCs的代谢，促进ASMCs的增殖， 中文摘要且呈剂量依赖性。 中文摘要 且呈剂量依赖性。 MTT比色分析表明，在0．1、0．2、O．3mmol／L HCY 刺激48小时后，培养的ASMCs的OD值比对照组分别 增加19．3％、42．9％、55．3％，各组均于对照组有显著性 差异(PO．0001)；且各组之间差异也有显著性 (P0．0001)。0．2mmol／LHCY组，细胞增殖显著，且光镜 下观察，细胞形态良好，因此选择0．2mmol／L作为刺激细 胞增殖浓度。 2．TF对由HCY刺激的大鼠ASMCs增殖有抑制作用。 由MTT比色测定表明，HCY组，经0．2mmol／L HCY作 用48小时后，OD值较对照组增加41．7％，且差别有显著性 (PO．01)。加入50，100及150u g／ml TF后，OD值 较HCY组分别降低7．4％，28．4％和50％。统计学分析表 明，TF浓度为100u g／ml时，能够很好地抑制由HCY 引起的大鼠ASMCs增殖，作用后与对照组无差别，因此 选择此浓度为药物作用浓度。 3．TF作用2天后能明显抑制由HCY刺激的大鼠平滑肌 细胞增殖，因此选择最佳作用时间为2天。 按实验分组于加药后的第1、2、3天，进行MTT比 色测定。统计学分析表明：第一天，三组之间无差别； 第二天，TF组与HCY组有显著性差别，而与对照组无 差别，说明经TF作用两天后，能明显抑制由同型半胱氨 酸刺激的平滑肌细胞增殖，作用后与对照组无差别。第 三天，TF的抑制作用与第二天相同。因此选择药物作用 最佳时间为两天。 4．HCY对ASMCs的增殖具有促进作用，研对由HCY