菠菜色素的提取和分离实验报告.docx

菠菜色素的提取和分离实验报告 　　菠菜中色素的提取和色素分离　　绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素、胡萝卜素和叶黄素等多种天然色素。　　叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg))，差别仅是a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂，也是食用的绿色色素，可用于糕点、饮料水等中，添加于胶姆糖中还可消除口臭。植物中a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于石油醚等一些非极性溶剂。　　胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体α—，β—,和γ—胡萝卜素，其中β—异构体含量最多，也最重要。生长期较长的绿色植物中，异构体中β—的含量多达90％。β—具有维生素A的生理活性，其结构是两分子维生素A在链端失去两分子水结合而成。生物体内，β—体受酶催化氧化即形成维生素A。目前，β—体可作为维生素A使用，也可作为食品工业的色素，β一胡萝卜素还有防癌功能。　　叶黄素是胡萝卜素的羟基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。在绿叶中通常是胡萝卜素的两倍。较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。由此可见，叶绿素等天然色素有广泛的用途，对于色素的提取与分离就显得很重要了．本实验就提取和分离做了相关的研究。　　1实验部分　　仪器与试剂　　仪器：研钵、分液漏斗、显微载玻片、毛细管、层析柱(20×10cm)、UV-240　　紫外分光光度计　　试剂：石油醚、乙醇(95%)、菠菜叶、丙酮(化学纯)、乙酸乙酯(化学纯)、无　　水硫酸钠、硅胶G、中性氧化铝(150目～160目)　　提取与分离　　浸泡法提取色素　　在研钵中放入20g新鲜的菠菜叶，加入20mL3：2(体积比)石油醚—乙醇混合液，适当研磨(不要研成糊状，否则会给分离造成困难)，用倾析法将提取液转　　移到分液漏斗中，每次用10ml水洗涤两次,以除去萃取液中的乙醇。洗涤时要轻轻旋荡，以防乳化。弃去水乙醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥，干燥后滤入小圆底烧瓶，在水浴上蒸发浓缩至大约lmL。　　薄层层析　　取四块显微载玻片，硅胶G经％羧甲基纤维素钠调制后制板，在室温下晾干后在110°C活化1h。选取效果最好的一块进行点样。　　展开剂：石油醚—丙酮=8:2　　石油醚—乙酸乙酯=6:4　　取活化后的层析板，点样，放入预先选定展开剂的广口瓶。瓶的内壁贴一张高5cm，绕周长4／5的滤纸，下部浸入展开剂中，盖上瓶盖。待展开剂上升至规定高度时，取出层析板，晾干，做出标记。　　分别用两种展开剂展开，比较不同展开剂的展开效果。观察斑点在板上的位置并排列出胡萝卜素、叶绿素和叶黄素的Rf值的大小。注意更换展开剂时，需干燥层析瓶，不允许前一种展开剂带入后一系统。　　柱层析　　取少量脱脂棉在小烧杯中用石油醚浸润后，挤压除去气泡，放在层析柱底部。在层析柱中加15cm石油醚。加入中性氧化铝8克，打开柱下活塞，保持石油醚高度不变，氧化铝在柱子中堆积。装完后，打开下端活塞，放出溶剂，直到氧化铝表面剩下1—2mm高为止。　　将浓缩液用滴管加到柱顶部，打开下端活塞，让液面下降到柱面以下1mm,关闭活塞，加数滴石油醚，打开活塞，使液面下降，几次反复，使色素全部进入柱体。　　在柱顶加洗脱剂——9：1石油醚—丙酮。打开活塞，用锥形瓶收集。当第一个有色成分即将滴出时，取另一锥形瓶收集，得橙黄色溶液，即胡萝卜素。　　2.结果与讨论　　提取　　由于甲醇与乙醇的极性相近，但是乙醇易得、无毒，所以用3：2的石油醚一乙醇通过浸泡的方法提取菠菜色素，而不是用石油醚—甲醇。　　分离　　薄层层析　　薄层层析又叫薄层色谱，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固—液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，可以用于少量样品的分离。实验中涉及的菠菜色素的比移值(Rf)列表如下　　在一定的色谱条件下，特定化合物的Rf值是一个常数，因此有可能根据化合物的Rf值鉴定化合物。　　菠菜色素中各种色素的比移值Rf大小为：胡萝b素叶黄素叶绿素，按此顺序它们的非极性依次减弱。物质极性的判断为柱层析中洗脱剂的选择提供了参考价值。　　柱层析　　胡萝卜素极性最小，因此胡萝卜素的洗脱剂用极性较小的9：l的石油醚-丙酮溶剂效果较好。但要收集其他几种色素得换用其他的洗脱剂，因为色素的极性各不相同，且有一定差别。如用7：3石油醚-丙酮分离叶黄素．分离出胡萝卜素和叶　　黄素后，可加大溶剂极性以较快速度洗脱叶绿素．用3：1：1的丁醇-乙醇-水洗　　脱剂洗脱叶绿素。　　3.结论　　采用浸泡法提取色素比抽滤法更好。在薄层层析时，用石油醚-丙酮=8:2时，能更