黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）的鉴定及分子检测-植物病理学专业毕业论文.docxVIP

福建农林人学硕I-学位论上 福建农林人学硕I-学位论上 虽瓜绿斑驳仡叶柏毒(CGMMV)的特定及分了榆测 摘要 黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV)是葫 芦科重要种传病毒之一，所引起的损失对葫芦科作物生产影响巨大。该病毒属我 国潜在危险性有害生物，目前口岸植物检疫部门常有截获，在国内少数地区新近 发现。该病毒是通过国际种子贸易、国内的种子调运进行远距离传播。因此，如 何快速准确地从进境种子中检测出该病毒是目前急需解决的问题。本研究开展了 CGMMV病毒的鉴定及分子检测方法研究等工作，为解决该问题提供了借鉴。 主要试验结果如下： (1)以广西南宁一温室的黄瓜病叶为材料，经汁液摩擦接种、透射电镜 观察、DAS—ELISA和RT-PCR方法，在该温室黄瓜病叶上检测到黄瓜绿斑驳花 叶病毒(Cucumbergreen mottle mosaic virus,CGMMV)。 (2)在对RT-PCR反应体系及扩增程序进行了优化的基础上，建立了免疫 捕获RT-PCR(IC—RT-PCR)的分子检测方法。我们把该分离物扩增到的CP基因 进行T-A克隆，经核苷酸序列分析表明，该分离物CP基因全长为486个核苷酸， 编码由161个氨基酸组成、理论分子量为17．3 kDa的蛋白，与国内外已报道的 CGMMV的CP基因相比，其核苷酸序列的同源性为91．4％～99．4％，其推导的 氨基酸同源性为98．8％～100％。 (3)设计6对引物，扩增经苋色藜单个枯斑接种葫芦病叶的编码区核苷 酸序列。经克隆、测序后，对6段核苷酸序列进行拼接，结果发现该分离物的编 码区全长为6188个核苷酸，编码1144个氨基酸。与国外己报道的CGMMV相 比，核苷酸序列的同源性为60．1％～98．2％，由此推导的氨基酸同源性为58．4％ ～99．0％。 (4)运用建立的IC．RT-PCR方法直接检测带毒种子，结果发现该方法能 从带毒种子中直接检测出CGMMV，比RT-PCR方法操作更为简便，特异性更强。 为检疫部门提供了从带毒种子中快速、准确检测该病毒的方法，很有应用前景。 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒；摩擦接种：DAS-ELISA：免疫捕获RT-PCR 序列分析 福建农林人学硕I：学位论文 福建农林人学硕I：学位论文 黄瓜绿斑驳化nI柏毒(CGMMV)的糯定及分子榆测 Abstract Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV)is all important seed—borne virus，which is responsible for devastating losses of cucurbitaceous crops．The virus is one of the potential hazardous pests in China．At present，it has been intercepted and captured frequently by port plant quarantine department，and it has been found at several regions recently．It’s long distance spread is transmitted through international trade or domestic trade of seeds．Therefore，it is impendency to develop detection progresses of CGMMV．In this study,methods of identification and molecular detection of CGMMV were developed．These methods Can help to intercept and capture the virus more efficiently．Major results are described as follows： (1)CGMMV Was detected by mechanical inoculation,transmission electron microscopy,double antibody sandwich ELISA(DAS—ELISA) and reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)in a cucumber sample which was collected