抗骨肉瘤中药的体外筛选-骨肿瘤专业毕业论文.docxVIP

硕士肇位论文：抗骨肉瘤中药的体外筛选 硕士肇位论文：抗骨肉瘤中药的体外筛选 中文摘要 1、中药提取物的制备 从中国药品生物制品检定所购买肿节风、白花蛇舌草、威灵仙、牛胆粉、 蟾酥、冬虫夏草、水蛭、羚羊角、灵芝、黄芪、麝香、地龙、全蝎、王不留 行、仙鹤草、制没药、忍冬藤、黄芩18种中药标准品。 由中山大学中药质量研究开发中心指导下配制： 天平精密称取适量对照中药材粉末，于150ml烧瓶中，相应溶剂浸泡2小 时，加热回流l小时，抽滤，滤渣用相应溶剂洗涤，合并滤液及洗涤液，减 压回收溶剂，残渣湿热灭菌，在无菌操作台上用相应已灭菌的溶剂转移至容 量瓶中，定容。 2、研究不同中药提取物对骨肉瘤细胞的细胞毒作用 选取U20S、MG63细胞株，用MTT法对肿节风、白花蛇舌草、威灵 仙、牛胆粉、蟾酥、冬虫夏草、水蛭、羚羊角、灵芝、黄芪、麝香、地龙、 全蝎、王不留行、仙鹤草、制没药、忍冬藤、黄芩18种中药标准品提取物的 细胞毒作用进行了测定。结果显示，蟾酥，牛胆粉对上述两种肿瘤细胞有一 定的抑制作用，它们的IC50值分别介于90·300u∥ml及60—300u∥ml之间。而 其它药物的细胞毒作用较弱，在高浓度时仍未达到半数抑制效果。故选择蟾 酥．牛胆粉进行凋亡的探讨。 3、形态学上观察蟾酥，牛胆粉对骨肉瘤细胞的作用 U20S和MG63细胞株经蟾酥，牛胆粉处理后，可见部分细胞变圆，变圆 细胞呈体积缩小，折光性增强。随作用时间延长，变圆细胞逐渐增多，部分细 胞脱壁，出现皱缩、变圆、脱落。可见坏死细胞及碎片。Hoechst 33258染色 可见染色质出现浓缩状态，凝集成块的凋亡改变，染色有核裂解、固缩、深染 的凋亡细胞出现。 II 硕士学位论文：抗骨内瘤中药的体外筛选 硕士学位论文：抗骨内瘤中药的体外筛选 中文摘要 4、FCM分析蟾酥，牛胆粉对细胞凋亡的影响 应用200ug／ml蟾酥水提取物分别作用MG63细胞株和U20S细胞株，发现 蟾酥水提取物对两种细胞株均具有促进其凋亡的作用。且凋亡率随着时间的延 长而增加，与对照组相比具有明显的差异性(MG63，P0．05；U20S，P0．01 )。 牛胆粉水提取物在低浓度作用下对骨肉瘤细胞株的促凋亡作用与对照组相 比无显著差异。在提高其作用浓度后(150—500ug／m1)，也具有促进凋亡作用。 5、Annexin V染色方法进行细胞早期凋亡的检测 对U20S细胞株进行蟾酥水提物的Annexin V染色分析，进行细胞早期凋 亡的检测。结果显示在200ug／ml蟾酥水提物随着作用时间的延长，第四象限即 早期凋亡细胞所占的比例增多。与对照组相比有显著的差异性(P0．05)。 结论 l、经过对肿节风、白花蛇舌草、威灵仙、牛胆粉、蟾酥、冬虫夏草、水蛭、羚 羊角、灵芝、黄芪、麝香、地龙、全蝎、王不留行、仙鹤草、制没药、忍冬 藤、黄芩18种中药标准品的体外筛选，发现了蟾酥和牛胆粉是两种对骨肉瘤 细胞株U20S和MG63比较有效的中药。 2、通过MTT，FCM，及形态学上的观察，证明了蟾酥、牛胆粉对骨肉瘤细胞 株有着抑制生长，促进其凋亡的作用，具有进一步开发的价值。 3、有必要对牛胆粉和蟾酥进行进一步研究，通过体内及体外实验以证明其有效 性及相关机理的研究。 4、本研究拟用现代医学的研究方法来论证传统抗骨肉瘤中药的作用，为抗骨肉 瘤中药的筛选方式进行了可行的探索。 IIl 硕士学位论文：抗骨肉瘤中药的体外筛选 硕士学位论文：抗骨肉瘤中药的体外筛选 中文摘要 关键词： 骨肉瘤 中药 蟾酥 牛胆粉 筛选 细胞凋亡 INⅥTRo INⅥTRo SCREEN玳G C硼ESE TRADITIoNAL HERBS FoR ANTI．oSTEOSARCo№k Major：surge巧 Postgraduate：Yin Junqiang Supervisor：Professor Shen Jingnan ABSTRACT Osteosarcoma is a kind of malignant bone tumor that main occurrence in teenager,the common clinical treatment including surgical operation therapy， radiation therapy、chemotherapy,etc，The clinical treatment and the understanding of biology characteristic of osteosarcoma have already come to a new level； Especially neoa埘uvant chemotherapy administration have i