抗绿脓杆菌的活性物质筛选及其有效成分分析-微生物与生化药学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 重庆理工大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究所 取得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写的成果、作品。对本文的研究做出重要贡献的集体和个人， 均已在文中以明确方式标明。 本人承担本声明的法律后果。 作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。 本人授权重庆理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行 检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于（请在以下相应方框内打“√”）： 1.保密□，在 年解密后适用本授权书。 2.不保密□。 作者签名： 日期： 年 月 日 导师签名： 日期： 年 月 日 目录 摘要 I Abstract II 1 引言 1 1.1 绿脓杆菌的临床危害 1 1.1.1 绿脓杆菌与人类健康 1 1.1.2 抗绿脓杆菌治疗的主要药物及其存在的问题 1 1.2 绿脓杆菌的多重耐药机制 1 1.2.1 细胞膜对抗感染药物通透性降低 1 1.2.2 药物作用靶位的改变 2 1.2.3 主动外排系统 2 1.2.4 细菌生物膜形成 3 1.2.5 破坏抗菌剂 3 1.2.6 整合子使耐药基因传播 3 1.3 新型抗绿脓杆菌药物的研究方向 4 1.3.1 抗菌肽的发现及定义 4 1.3.2 抗菌肽的来源及特点 5 1.3.3 抗菌肽的结构 6 1.3.4 抗菌肽作用机理 6 1.4 抗菌肽的应用 8 1.5 研究背景及意义 8 1.6 论文研究的主要内容及技术路线 9 1.6.1 主要内容 9 1.6.2 技术路线 9 2 实验内容 11 2.1 实验材料 11 2.1.1 培养基 11 2.1.2 试验菌种 11 2.1.3 土壤样品 11 2.1.4 主要试剂 11 2.1.5 主要仪器设备 12 2.2 方法 12 2.2.1 拮抗绿脓杆菌的微生物筛选 12 2.2.2 拮抗绿脓杆菌菌株分离 12 2.2.3 菌株的鉴定 13 2.2.4 拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分表达条件优化 14 2.2.5 拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分的纯化 15 2.2.6 拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分的特性分析 17 3 结果与分析 19 3.1 拮抗绿脓杆菌的微生物筛选 19 3.1.1 初筛结果 19 3.1.2 菌株编号 20 3.1.3 革兰氏染色 20 3.1.4 菌株的分子系统学鉴定 21 3.1.5 蛋白酶 K 处理结果 22 3.1.6 供试菌选择 22 3.2 拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分表达条件优化 23 3.2.1 不同培养基对拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分表达的影响 23 3.2.2 培养时间对拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分表达的影响 23 3.2.3 温度对拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分表达的影响 错误!未定义书签。 3.2.4 起始 pH 对拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分表达的影响 24 3.3 拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分的纯化 25 3.3.1 硫酸铵分级沉淀 25 3.3.2 等电点沉淀目的蛋白 26 3.3.3 分子筛分离目的蛋白 28 3.4 拮抗绿脓杆菌抗菌活性成分的特性分析 28 3.4.1 活性成分的分子量测定 28 3.4.2 活性成分的等电点测定 28 3.4.3 活性成分的温度敏感性测定 29 3.4.4 活性成分的 pH 敏感性测定 30 4 讨论 31 4.1 抗绿脓杆菌微生物的筛选 32 4.2 菌种鉴定 32 4.3 发酵条件优化 33 4.4 抗菌肽的性质研究及纯化 34 5 小结 36 参考文献 38 致谢 44 附录 1. 16SrDNA 测序结果 46 ? 摘要 摘要 摘要 绿脓杆菌作为三大机会致病菌之一，对机体免疫功能低下人群有强致病性。随着 免疫抑制剂、广谱抗生素、化疗和各种侵入性诊治措施增多，此菌的临床感染率逐年 增高。目前抗绿脓杆菌感染的治疗主要依赖多种抗生素，然而大量绿脓杆菌多药耐药 菌株近年来不断出现，使得感染后的治疗越来