绵羊玻璃化冷冻胚胎直接移植试验研究-动物遗传育种与繁殖专业毕业论文.docxVIP

摘要本研究应用EFS40玻璃化液对6．5～7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接 摘要 本研究应用EFS40玻璃化液对6．5～7日龄的绵羊胚胎进行玻璃化冷冻及解冻后直接 移植试验。掰用胚骀郝是经FS}{超费#处理绲羊获褥的。艇脓经形态攘定后，蹦胚骀存放 液(含20“FCS的PBS液)清洗。冷冻前，胚胎在室温(18-25℃)下置于含10％乙二 醇的PBS液中平衡10分钟，穆入玻璃化液EFS40中装臀并平衡30秒钟，液氮气中熏 蒸2努锋螽投入液氮审傈存，熬冻嚣在筑滠(t8-25℃)空气浴10移镣嚣，32℃承浴20 秒钟解冻。 试验1：胚胎解冻后以0．SM蔗糖液一步(6分钟)除去保护剂或用珏胎存放液一步 赢援除去傈护荆，然艏胚胎移入胚胎存放液中洗3次，将形态正常的胚胎手术移植至同 明辩完整率为100％(27／27)；彤态完整举为77．78％(21／27)，移植届的妊娠窭为4737％ (9／19)，胚胎存活率为42．86％(9／21)，其中桑椹瓤、囊疆的冻后形态完整率分羽为81．82 ％(9／11)、75．00％(12／16)(P0．05)，差异不驻著；桑椹胚和囊胍移植后的妊娠率分 剥笼37．50％(3／8)、54。55％(6411)，骚黪存活辜分剐巍33．33％(3／9)、50．00％(6／12)， 差择均不显蓿(Po．05)。13枚冷冻胚腑解冻后用0．5M蔗糖脱防冻荆，其中lO枚形态 恢复正常(76．92％)，与直接用胚胎存放液脱除防冻剂的结果(78．57％，1 1／14)无差异 (P0．05)。将两种方法解冻鹩形态正常的嚣胎移植，移攮后的鳋娠率分剐灸44．44％ (4／9)、50．00％(5110)、胚胎存活率分别为40。oo％(4／10)、45．45％(5／11)(P0．05) 差努不显蓑；试验2将lO投解冻蠢豹憝齄细营内髓茨冻裁嫠，壹接装警移擅绘8爰受髂 (其中2只受体移植双胚)，妊娠率为50．oo％(4／8)，胚胎成活率为柏．00％(4／10)，(麓 中受体1只在妊娠后第2个月流产，最艏有3只爨体产3只羔羊)与同期常规冷冻解冻 缀辎院无显藩差异(P0．05)。， 本研究结果表明：绵羊胚胎应用EFS40进行玻璃化冷冻．解冻偌用胚胎存放液细管 内脱除防冻刹螽直接移植获褥较糍的的妊娠率和疑始存活攀。该方法与常规方法比较麓 便、省时、可普及，特别是能降低绵羊胚胎移植的成本，加速绵羊品种改良。 关键词：缡羊：坯鼢：玻璃纯；EF$40；壹接移楗 V Direct Direct Transfer ofVitrified Sheep Embryos Abstract Direettransferofvitrified sheepembryosbythemethodofvitrification(EF$40)was studied．Embryos we踏obtained surgically from supemvulated donors on 6．5～7 days after the OIISct ofastms(onset ofes删day)．A腑r being graded according to morphology,embryos wc黪w笛k畦in embryo holding solution(PBS supplemented with 20％FCS)。only those classified as excellent and good Wele processed．Befom vitrification,embryos were kept at roomtamperature(1鼽25℃)forlomininPBS-FCScontainin910％ethylene glycol(EG)， and finally plunged for 30see into vitrification solution EFS40(PBS-FCS with EG豹％and ficoU 18％and sucrose O．3M)．then loaded into O．25ml straws．11SlImws were fumigated with liquid nitrogen vapor for 2min before they wcle plunged into liquid nitrogen(LN2)． Straws were thawed 10 s∞in air(18—25℃)followed 20 see in a 32℃water bath．1n experiment 1，a蠡盯being thawed。embryos wem washed for cryopmtectant removal by one step