柯萨奇B组3型病毒在内皮细胞系持续感染模型的建立-病原生物学专业毕业论文.docxVIP

天津医科大学{蠹士骚究生学位论文英文缩略语 天津医科大学{蠹士骚究生学位论文 英文缩略语 ㈣ 细胞病变效应 0 蒴萨奇B缀3型病毒 溉邺SA 酶联免疫吸附试验 ∞ 。 传代人脐静脉内皮细胞 ‰姗B∞ 50％缓织细藏感染蠡 脚 辣根过氧化物酶 溉t 。H 生物寨 懈 四甲基联苯胺 ∞ 壳密度 燃 磷酸盐缓冲生理盐水 黼 胎牛血清 黔? 吐瀑磷酸盐缓捧生壤盐隶 漱 十二烷基磺艘钠 麟 乙=羧霆乙羧镳 D 二甲基亚砜 蝴瓣一 a 瓣瘸环死嚣予一a 眦： 焦碳酸二己黯 ：量， c 非洲绿猴臀细胞 天漳越辩夭学磺士研究生学德瓷文摘要 天漳越辩夭学磺士研究生学德瓷文 摘要 以TCID*为1019／ml CVBs感染ECV一建立持续感染细胞模型。对模型细胞 各种捡翱簇示：CVB3在ECVw可持绥感染180天驭t，不产生CPE；持续感染过 程中细胞可释放肖感染性的病毒颗粒，病毒效价TCI％多程10．3／rnl左右；空斑 试验表明，释放瘸毒的细胞数为l％--2％；感染细胞表面有病毒抗原的袭达： 释放少量TNF--G，但自绑胞粘赡魅力无改变；用RT--PCR可检测嶷感染纲憨孛 有CVBa的旗因存在，但电镜宋观察剿完整病毒颗粒。这些结果均表明CVB,在Ecv。 审持续存农，病毒与绥魔之耀趣对泽簿，撵示盘譬内疫缍熬霹憝传为CVB长赣释 放的储主，而形成持续感染细胞模型。该模型将用于研究CVB持续感染的机制， 撬e疆骜耨静簿选等，为CVB持续戆染静簖治提供有力工舆。 关键词：CVB3’EcV“，持续懑染，细胞模型 2 天津医科大学硕士研究生学位论文Abstract 天津医科大学硕士研究生学位论文 Abstract The model of persistent infection of vascular endothelial cellS with CVB3 in vitro was establ ished．The persistently infected ECV3¨ have been maintained for over 45 passages(180days)and have released virus continuously without cellular destruction．Infectious center assays showed only 1—2％cells released CVB．Viral antigen could be detected．Inherent ability of WBC didn’t change．The CVB3’S genes could be detected in ECVⅫby RT—PcR．CVB3 can persistently infect ECV3“ in vitro，suggesting that endothel ial celIs may consititute a reservoir for long—term virus production and therefore be especially rel evant to the development of chroni C di seases． Key word：CVB3，ECk．，persistent infection，model 天津医科大学硕士研究生学位论文前言 天津医科大学硕士研究生学位论文 前言 CVB是人类肠道病毒，属小RNA病毒科，为人类重要的病原体之一，可引起 流行性胸痛，手、足、口病，无菌性脑膜炎．脑炎，心肌炎和心包炎。Ⅲ特别 是原发性心肌炎，患者可转为慢性，晚期可形成扩张型心肌病，导致心衰，预后 不良。∽1其中由CVB。引起的心肌炎最为多见，其致病机理可归纳为病毒对心肌 细胞的直接损伤和病毒诱导对心肌组织的自身免疫损伤，尤其是病毒在心肌组织 中的持续存在是导致病毒性心肌炎迁延不愈及引发扩张型心肌病的重要原因。“1 近年来，国外学者用CVB、脊髓灰质炎病毒、埃可病毒6型、人疱疹病毒8 型等感染人血管内皮细胞、人横纹肌肉瘤细胞、心肌纤维细胞及小鼠的胰岛素瘤 细胞等，建立了病毒在细胞内的持续感染模型，并探讨病毒在细胞内持续感染机 制．m1目前认为病毒在细胞内持续感染可能是由于病毒的有限复制、“””病毒毒 力的下降及细胞抵抗力的增加、抗病毒介质等各种因素的作用。 本文选用从美国ATCC公司引进的一株传代人脐静脉内皮细胞EcV。，该细 胞为自发突变可无限传代的血管内皮细胞，其主要生物学特性与原代细胞相似， 可代表正常人体的脐静脉内皮细胞。由于CVB在病毒血症期可进入血流感染血管 内皮细胞或已被CVB感染的细胞经血管内皮细胞转移，通过内皮屏障，感染相应 靶组织。“司故本研究探索建立CVB。在ECV。。