绵羊grb7基因的表达及对胚胎附植的影响-农业推广专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 SHIHEZI UNIVERSITY MASTER’DEGREE DISSERTATION The Expression of grb7 and its Influence on Embryo Implantation in Ovine A Dissertation Submitted to Shihezi University In Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Agriculture By Gong bin Dissertation Supervisor: Prof. Shi Guo-qing May,2015 万方 万方数据 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果.据我所 知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果. 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意. 研究生签名:矶持飞 时间:刘〈了年 d 月 8 日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向 国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并 允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论 文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定. 研术生签名:饥斌、 l币签名 : 7u \ 时间: 沁 IS年 6 月 8 日 时间:).D(_f年 j 月 F 日 万方数据 万方数据 本研究经费资助 863 计划 牛、羊分子细胞工程育种技术创新与优势性状新品系培育 项目编号：2011AA100307 “十二五”国家科技支撑项目子课题 超细型细毛羊新品种(系)选育与关键技术研究 项目编号：2011BAD28B05-1-1 兵团育种攻关 细毛羊新品种（系）选育与高效养殖创建示范 项目编号：2011BA006 摘要 本试验以中国美利奴细毛羊（军垦型）40 只为研究对象，利用同期发情处理、半定量 RT-PCR、荧光定量 RT-PCR、HE 染色和免疫组织化学等方法，探究绵羊 grb7 基因的表达及 对胚胎附植的影响。试验结果如下： 繁殖季节里利用孕酮海绵栓与 PMSG 结合的方法探究石河子地区绵羊同期发情，可以 使总发情率达到 85%以上。具体操作：任意选取同一天放置孕酮海绵栓，12 天后撤栓并注 射 PMSG 330 IU，自撤栓后第 24 h 开始至第 72 h 截止，每间隔 12 h 试情一次，观察母羊发 情情况，记录发情数，统计分析撤栓后 24 h-72 h 的发情率。 通过组织表达谱检测，结果表明，grb7 在 21 d 怀孕母羊的心脏、皱胃、大肠、小肠、 瘤胃、下丘脑、大脑、小脑等组织均未检测出表达，在输卵管、肾脏、子宫体、卵巢、垂体、 脾脏及膀胱等组织出现特异性表达，其中在输卵管、子宫体、卵巢和垂体等与生殖密切相关 的组织相对表达量较高，提示 grb7 可能在母羊妊娠过程中发挥重要作用。 实时荧光定量 PCR 结果显示，从绵羊妊娠第 9d 至 25d 阶段，grb7 在母羊子宫内膜组织 的表达量呈逐渐上升趋势，孕羊 grb7 的表达量均显著高于同一时间点同期发情的未孕母羊。 grb7 在胚胎附植期绵羊子宫内膜中的 mRNA 表达呈动态时空变化，提示 grb7 可能在绵羊早 期胚胎附植中发挥着重要的作用。 HE染色和免疫组织化学研究表明，胚胎附植期绵羊子宫内膜中GRB7蛋白主要定位于子 宫内膜上皮，且呈现动态时空变化。本试验结果表明grb7基因在绵羊早期胚胎附植中发挥着 重要的作用。但GRB7蛋白在附植过程中分子调控网络及通路的作用机制尚未完全清楚，后 续试验需要进行怀孕25d之后的子宫内膜和孕体方面研究。 关键词：绵羊；grb7；子宫内膜；胚胎附植 论文类型：B（应用研究） I Abstract Forty xinjiang fine wool sheep were selected to conduct this experiment. We detected the expression situation of growth factor receptor bound7 (grb7) gene and explored the effects on embryo implantation in ovine by the synchronization of estrus, the semi quantitative RT-PCR, the r