蒙药山沉香挥发油成分分析及抗心肌缺血作用研究-生物制药工程专业毕业论文.docxVIP

华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 I I 摘 要 缺血性心脏病是当今世界重大疾病之一，由于目前尚无有效的治疗手段，其发 病率和死亡率一直居高不下，严重危害着人类健康。寻找和开发抗心肌缺血药物一 直是药物研究中的热点。我国传统中医药和民族药物有着悠久的应用历史，其中有 很多物质具有抗心肌缺血的活性，蕴藏着丰富的资源。从这些已知临床应用效果的 天然产物中寻找活性药物，是开发新药非常有效同时也是非常重要的途径之一，将 达到事半功倍的效果。 蒙医药是我国具有鲜明特色的民族医药之一，在内蒙古地区至今仍有广泛应用。 但其现代研究起步晚，其中有很多已知确切疗效的药物，不明其物质基础和药理作 用。山沉香就是其中之一。山沉香（Syringa pinnatifolia Hemsl．var．alashanensis Ma et S. Q. Zhou）别名贺兰山丁香，主要分布于内蒙古贺兰山地区，为内蒙古地区特有 品种，在阿拉善地区民间医药中有着长期的应用。蒙药中山沉香可镇“赫依”病， 多用于胸闷气短、心绞痛等心肺疾病的治疗，可治“热邪侵于心脏的一切疾病”，在 缺血性心脏病的防治中有着较好的疗效。但是，目前山沉香的化学成分的研究十分 薄弱，药理作用的研究更是一片空白，严重制约了该药的进一步应用。本文以山沉 香挥发油为主要研究对象，研究了其抗心肌缺血的药效学作用，结合多种动物模型 和细胞模型，从不同层次水平上研究了其心肌保护作用。采用顶空液相微萃取法 （HS-LPME），结合气质联用技术（GC-MS），对山沉香挥发油的快速分析和药材中 花姜酮的含量测定进行了研究。同时开展了山沉香乙酸乙酯提取物化学成分的初步 研究。主要结果如下： （1）建立了一种对山沉香挥发油进行快速测定的顶空液相微萃取气质联用法 （HS-LPME-GC-MS），对液相微萃取条件进行优化得到的最佳处理条件为：山沉香 粉末 1.0 g（80 目），1.0 μL 苯甲醇于 70℃萃取 20 min 后进样。采用所建立的方法 对山沉香挥发性成分进行了分析，鉴定出 52 种组分，水蒸汽蒸馏法（SD）提取的挥 发油鉴定出 50 种组分。两种方法所得成分中 36 种相同。相同组分的总百分含量占 II II 水蒸汽蒸馏法所得挥发油的 95 %。由于 HS-LPME 简便、快速、能耗低，所用药材、 溶剂均极少，并可达到与 SD 法相似的结果，可作为传统水蒸气蒸馏的替代方法，用 于快速分析山沉香挥发油及其他药材挥发性成分。 （2）采用超声法和顶空液相微萃取法结合，研究了 UA-HS-LPME-GC 测定山沉 香药材中花姜酮含量的方法。对 UA-HS-LPME 条件如超声溶剂、超声时间、萃取溶 剂、萃取温度、萃取时间进行了考察。对所建立的方法进行了方法学论证，研究结 果表明，方法特异性强，准确率高，重现性好。 （3）研究了山沉香挥发油对实验性心肌缺血的保护作用。首先考察了山沉香挥 发油对小鼠常压耐缺氧能力的影响。以小鼠在常压密闭环境下耐缺氧的存活时间为 指标，考察了其对机体耐缺氧能力的影响。结果显示，山沉香挥发油 8 mg/kg 和 32 mg/kg 均能显著延长小鼠常压耐缺氧的存活时间，其中 32 mg/kg 挥发油组的存活时 间与阳性药物普萘洛尔组十分接近，无显著性差异，说明山沉香挥发油能够在整体 上增强机体对缺氧状态的耐受程度。这种作用的发挥可能与其增加心肌供血、降低 心肌耗氧量有关，对于保护心肌缺血具有重要的意义。 采用冠状动脉左前降支结扎法复制心肌缺血模型，对心肌缺血程度、缺血后血 清酶谱和损伤标志物进行了检测，考察了山沉香挥发油对大鼠急性心肌缺血的保护 作用。并对病理学切片和心肌细胞超微结构进行了观察。研究结果表明，山沉香挥 发油可减少大鼠心电图 ST 段的偏移量，降低心肌缺血的程度。同时山沉香挥发油还 可降低冠脉结扎后肌酸激酶（ creatine kinase ， CK ）和乳酸脱氢酶（ lactate dehydrogenase，LDH）的水平，降低心肌损伤标志物心肌肌钙蛋白 T（cardiac Troponin T，cTn T）的含量，升高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的活性。组 织病理学切片和心肌细胞的电镜照片的观察发现，山沉香挥发油能够降低模型组心 肌细胞的坏死程度和炎症细胞的浸润范围，并且能够保护心肌细胞线粒体、肌质网 等重要结构。证明山沉香挥发油具有显著的抗急性心肌缺血的活性，能够提高心肌 细胞抗脂质过氧化的能力，稳定心肌细胞膜，保护心肌细胞内部结构和生理功能。 考察了山沉香挥发油对大鼠体外血小板聚集的影响。采用电阻法在全血中测定 血小板聚集度，以电阻值表征聚集度的大小，以 ADP 为诱导剂。结果表明，山沉