马鞍藤产树脂糖甙内生真菌的筛选及发酵条件优化-植物保护专业毕业论文.docxVIP

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  • 2019-05-14 发布于上海
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马鞍藤产树脂糖甙内生真菌的筛选及发酵条件优化-植物保护专业毕业论文.docx

独创性声明 本人声明,所呈交的学位(毕业)论文,是本人在指导教师的指导下独立完成 的研究成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标注和致谢中已作了 答谢的地方外,论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研 究做出贡献的同志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意,如被查有侵犯他 人知识产权的行为,由本人承担应有的责任。 学位(毕业)论文作者亲笔签名: 日期: 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定,即学校 有权送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或部 分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密,在 年后解密可适用本授权书。 □ 不保密,本论文属于不保密。 □ 学位(毕业)论文作者亲笔签名: 日期: 指导教师亲笔签名: 日期: 目录 摘要 I 第一章 前言 1 1.1 马鞍藤简介 1 1.2 树酯糖甙研究进展 2 1.3 植物内生菌研究进展 2 1.3.1 植物内生菌的发现2 1.3.2 植物内生菌的多样性3 1.3.3 植物内生菌的应用3 1.3.4 内生菌研究中存在的问题及发展前景 6 1.4 试验的目的和意义 7 第二章 马鞍藤内生真菌的分离及筛选8 2.1 试验材料和试剂 8 2.1.1 植株采集与处理8 2.1.2 试验试剂8 2.1.3 试验仪器8 2.1.4 分离培养基9 2.1.5 筛选培养基9 2.2 试验方法9 2.2.1 内生真菌的分离9 2.2.2 内生真菌的纯化10 2.2.3 目标菌株的筛选 11 2.2.4 发酵产物的检测 11 2.3 结果与分析 11 2.3.1 内生菌分离及纯化结果 11 2.3.2 目标菌株筛选结果13 2.4 小结 14 第三章 目标菌株的鉴定15 3.1 试验材料和方法 15 3.1.1 试验菌株15 3.1.2 试验试剂15 3.1.3 试验仪器15 3.1.4 试验软件16 3.2 试验方法 16 3.2.1 单孢子培养16 3.2.2 形态学鉴定16 3.2.3 分子生物学鉴定16 3.3 结果与分析 19 3.3.1 形态学鉴定结果19 3.3.2 分子生物学鉴定结果21 3.4 小结 26 第四章 发酵条件优化27 4.1 试验材料和方法 27 4.1.1 试验菌株27 4.1.2 试验试剂27 4.1.3 试验仪器27 4.1.4 种子液的制备27 4.1.5 产物产量的测定27 4.1.6 试验软件28 4.2 试验结果 28 4.2.1 单因素试验结果28 4.2.2 Plackett-Burman 试验 36 4.2.3 最陡爬坡试验39 4.2.4 响应面试验39 4.2.5 回归模型的验证44 4.3 小结 45 第五章 总结和展望 46 5.1 试验总结 46 5.2 展望 46 参考文献 48 致谢52 I I 摘要 马鞍藤是一种含有很多活性物质的固沙植物和药用植物,在环境绿化和医药 方面有很好的利用价值。有很多研究通过化学方法从马鞍藤中提取出了许多有用 的物质,其中树脂糖甙作为番薯属植物的特征化学成份,具有新颖的化学结构和 多样的生物活性,为新化合物的合成和新药物的研制提供了很好的依据。本试验 从马鞍藤中筛选出一株能产生树脂糖甙的内生真菌 MJ8,鉴定出目标菌株并进行 发酵条件的优化来提高树脂糖甙的产量。试验结果如下: 1)采用组织分离法,从马鞍藤的茎和叶中分离出内生真菌 120 株,然后通过摇 瓶发酵对分离出的内生菌进行筛选,将发酵液通过柱层析和蒸馏后采用薄层 色谱法与标准品对照。最终筛选出一株内生真菌 MJ8 可以产生树脂糖甙。 2)首先通过形态学方法,观察 MJ8 的菌落、菌丝和分生孢子形态,初步归类为 拟盘多毛孢属真菌,然后运用分子生物学方法分析 18S rDNA 序列和 ITS 序 列并构建系统发育树,结果表明 MJ8 可能为一株新的拟盘多毛孢属真菌。 3)首先通过单因素试验确定发酵的氮源、碳源和发酵时间,并确定 PDB 培养基 内部各种物质的最佳条件,然后通过 Plackett-Burman 试验筛选出对试验结果 有显著影响的 4 个因子乳糖、硫酸铵、温度和接种量,最后采用 Box-Behnken 试验进行响应面分析确定了发酵的最佳条件为乳糖浓度 40.200g/L,硫酸铵浓 度 13.800g/L,温度 31.8℃,接种量 5%,硫酸亚铁浓度 0.010g/L,氯化钾浓 度 2.

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