空气中3种常见病原菌快速定量检测方法研究-微生物学专业毕业论文.docxVIP

河北大学 河北大学 学位论文独创性声明 本人郑重声明： 所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知， 除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位或证书 所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确 的说明并表示了致谢。 作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人完全了解河北大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布 论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 本学位论文属于 1、保密 □ ，在 年 月 日解密后适用本授权声明。 2、不保密 □ 。 ( 请在以上相应方格内打“√” ) 摘 要 摘 要 微生物主要以气溶胶的形式存在于空气中，气溶胶颗粒较小，容易造成空气污染。 空气微生物不仅是室内空气的污染源，而且是影响室内工作人员健康的一个重要因素。 本论文通过免培养方法研究了实验室空气细菌的组成和多样性，在此基础上建立了大肠 杆菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼氏不动杆菌这三种空气常见病原微生物的快速定量检测方 法。 采用微孔滤膜法采集实验室空气环境中的微生物，根据滤膜孔径、采样时间等因素 设计空气样品采集方案，发现适宜的滤膜孔径为 0.2 2μm，采样时间和气流速度对微生 物的采集效率的影响不明显，但需根据气体流速选择适当的采样时间，以保证得到足够 数量用于 DNA 提取的微生物；通过掺菌法比较 3 种 DNA 提取试剂盒和 DNA 快速提取 液的提取效果，发现土壤基因组 DNA 快速提取试剂盒的提取效果较好，但对金黄色葡 萄球菌 DNA 提取效率较低，加入溶葡球菌酶和改进操作后可满足空气样品宏基因组 DNA 提取；采用 16S rDNA 克隆文库法分析了空气样品细菌的多样性组成：包括芽孢 杆菌属(Bacillus) (60.3%)、葡萄球菌属(Staphylococcus) (1.2%)、不动杆菌属(Acinetobacter) (19.4%)、副球菌属(Paracoccus) (14.9%)、肠杆菌属(Enterobacter) (0.7%)、棒状杆菌属 (Corynebacterium) (0.7%) 、贪铜菌属 (Cupriavidus) (0.5%) 、赛托氏菌属 (Schlegelella) (0.5%)、鞘氨醇盒菌属(Sphingopyxis) (0.5%)、黄单胞菌属(Xanthomonadaceae) (0.5%)、 微枝形杆菌属(Microvirga) (0.2%)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas) (0.2%)、非培养的假 单胞菌目 (uncultured Pseudomonadales) (0.2%) 和非培养的红细菌目 (uncultured Rhodobacterales) (0.2%)。根据多样性分析结果，选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鲍曼 氏不动杆菌为空气中待测病原菌，大量调取这三种菌的不同基因的序列，利用 BioEdit、 primer premier 5.0、DNAstar、DNAuser、Annbyb222 等软件设计和筛选出这三种菌的特 异性强、覆盖度高的引物用于荧光定量 PCR 检测，并用筛选得到的特异引物制作了三 种空气常见病原菌的荧光定量 PCR 程序和定量曲线，建立了这三种空气病原菌的荧光 定量 PCR 检测方法。 关键词 16S rDNA 克隆文库 空气细菌 组成和多样性 病原菌 定量检测 I Abstract Abstract The airborne microorganisms are not only the source of contamination in the microbial lab, but also make up of potential threats to the health of the work staff. Culture-independent methods were used to analysis the composition and diversity of the airbrone bacteria, then quantitative detection procedures for Escherichia coli, Staphylococcus aureus and Acinetobacter baumanii were established respectively on the basis of 16S rDNA cl