慢性氟中毒大鼠骨组织中Notch经典信号通路研究及与Twist的关系探讨-病理学与病理生理学专业毕业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生毕业论文 PAGE PAGE 2 慢性氟中毒大鼠骨组织中 Notch 经典信号通路研究及与 Twist 的 关系探讨 专 业：病理学与病理生理学 研究生：万 雯 导 师：于燕妮 教授 【摘要】 目的 研究慢性氟中毒大鼠成骨细胞中Notch经典通路重要因子（Notch1、 Jagged1和Hes1）及Twist 蛋白和mRNA表达变化，探讨该信号通路在氟骨症发生 中的作用机制及与Twist的可能关系。 方法 36只SD大鼠随机分为3组，每组12只，组内雌雄各半。对照组饮用自 来水（含氟F﹣＜0.5 mg／L），低氟组、高氟组分别饮用加氟5 mg/L、50 mg/L的 自来水。实验8个月后股动脉放血处死，采用氟离子选择电极法检测大鼠尿氟、 骨氟含量。取大鼠股骨下段，HE切片观察骨组织病理学变化，并测定骨皮质厚度、 骨 小 梁 宽 度 等 骨 形 态 学 指 标 。 采 用 免 疫 组 织 化 学 方 法 测 定 骨 组 织 Notch1、 Jagged1、Hes1及Twist蛋白表达水平，原位杂交技术测定Notch1、Jagged1、Hes1 及Twist的mRNA表达水平。 结果 （1）实验组大鼠出现不同程度氟斑牙，且高氟组重于低氟组；染氟 组大鼠尿氟、骨氟含量均明显高于对照组，各组间比较差异有统计学意义(P＜ 0.05)，慢性氟中毒大鼠模型复制成功。(2) 氟中毒组大鼠股骨出现骨皮质增厚， 骨小梁宽度增加，骨密度增加等骨质硬化表现，与对照组比较，各检测指标差异 有统计学意义(P＜0.05)，且随染氟浓度增加病变加重。（3）与对照组相比，染 氟组大鼠成骨细胞中Notch1、Jagged1、Hes1和Twist 蛋白及mRNA表达均降低， 差异有统计学意义(P＜0.05)；两染氟组间比较，Twist 蛋白及mRNA表达差异不 明显。（4）相关性分析显示Notch1、Jagged1及Hes1蛋白表达水平两两呈正相关。 结论 过量氟可下调Notch通路重要因子（Notch1、Jagged1和Hes1）及Twist 在成骨细胞中的表达，四者的低表达均对高氟环境下成骨细胞分化及骨形成的抑 制作用降低。提示慢性氟中毒大鼠骨质硬化病变发生机制中Notch经典通路起着 重要作用并可能与Twist有着协同关系。 【关键词】氟中毒；骨；成骨细胞；Notch；Twist；原位杂交；免疫组化 前 言 氟是人体必须的微量元素之一，其化学性质活泼，能与多种元素直接合成氟 化物，并以各种形式广泛分布于水，土壤，空气和动植物体中，对人类的健康有 着直接的影响。然而氟的安全范围窄，不仅仅是高氟会对人体造成损害，低氟同 样会影响人体对重要元素钙、磷的吸收从而引起相应的疾病[1]。在特定地区的人 群，由于饮水和食物中氟含量过高，使该地区人群长期摄人过量氟而引起的慢 性中毒性疾病，即是地方性氟中毒（简称地氟病）[2]。我国是地氟病流行最为严 重的国家之一，由于其发病机制尚未完全阐明，部分病区人群仍处于高氟的危害 中。 氟中毒对机体的损伤多样，临床主要表现为氟斑牙和氟骨症，其中又以氟骨 症的危害最为严重，发病机制也最为复杂。近年来，随着大量动物实验和体外细 胞培养的进行，已有充分依据证明成骨细胞功能活跃是一个发生较早并起主导作 用的环节，在其基础上的骨转换加速是氟骨症的特征性病变，是形成骨病变多样 性的病理基础[3-4]。因此，研究氟骨症的发病机制，首先就要回答在慢性氟中毒 时成骨细胞是怎样被激活的。目前，骨代谢局部调控网络相关因子的作用已被作 为过量氟导致成骨细胞激活主要涉及的方面之一进行深入研究。 Notch信号传导通路是一条广泛存在的、保守而重要的细胞间信号转导通路， 几乎涉及所有细胞的增殖、分化和凋亡以及一系列生理、病理过程[5]。近来有许 多证据表明Notch信号参与了成骨细胞的分化和骨形成[6-7]。当相邻细胞间的跨膜 蛋白配体（Delta1、Delta3、Delta4、Jagged1、Jagged2）与同样是跨膜蛋白的 受体（Notch1、2、3、4）[8]结合后，该受体发生两次蛋白水解事件，第二次水 解释放的Notch受体胞内区(NICD)直接转位到细胞核，同DNA结合蛋白及其辅激活 物共同开启下游基因的转录[9]，此为经典的Notch信号转导通路，被转录的基因 有HES1、5、6、7以及HEY1、2、L，其中，HES1和5在Notch信号通路中发挥重要 作用。除了DNA结合蛋白依赖型的经典途径外，Notch信号通路还存在不需DNA结 合蛋白调控的非经典途径或通过其他信号途径发挥作用，但具体机制尚不清楚 [10]。 Notch1、Jagged1和Hes1是Notch经典信号通路中重要的受体、配体及靶基