曼氏裂头蚴超微结构的观察及不同理化因素对裂头蚴感染性影响的研究-病原生物学专业毕业论文.docxVIP

- - PAGE 10 - 曼氏裂头蚴超微结构的观察及不同 理化因素对裂头蚴感染性影响的研究 专业：病原生物学 研究生：唐贵文 导师：陈 艳 教授 摘要： 目的：曼氏裂头蚴病是一种重要的食源性寄生虫病，近年来，对食源性曼 氏裂头蚴病的研究主要集中在中间宿主的感染率调查和病例报道上，在免疫学、 蛋白质组学、分子生物学也有一些研究，而对裂头蚴结构和功能的关系，不同 理化因素对裂头蚴感染性的研究甚少，本实验在前期工作的基础上，就以下几 方面展开了研究： 1、建立小鼠动物模型，利用组织学动态观察小鼠体内不同发育时间的裂头 蚴和寄生组织的病理学特点。 2、利用电镜技术对曼氏裂头蚴进行超微结构的观察，进一步了解裂头蚴结 构和功能的关系。 3、通过不同理化因素对裂头蚴进行体外处理后再感染小鼠，以此了解不同 理化因素对裂头蚴感染性的影响。 方法： 1、实验动物感染：在贵阳市农贸市场购买黑斑蛙，从黑斑蛙中分离出裂头 蚴，感染昆明小鼠，实验组以 3 条/只通过口服法感染，对照组不感染裂头蚴， 建立小鼠动物模型，于感染后第 2、4、6、8、10 周分别处死小鼠，肉眼观察虫 体寄生部位组织的病理损伤情况。 2、常规组织病理学观察：选取实验组中含裂头蚴的小鼠组织和对照小鼠组 相应部位的组织制作病理组织切片，行 HE 染色，利用光学显微镜观察。 3、电镜超微结构观察：取黑斑蛙大腿肌肉内的曼氏裂头蚴，将其头颈部修 整好，戊二醛固定，作常规电镜观察标本处理后，应用扫描电镜和透射电镜观 察裂头蚴表面及皮层的超微结构。 4、理化因素处理：选取含裂头蚴的蛙肉，进行如下处理： (1) 将含裂头蚴的蛙肉分别放入-20℃、4℃、20℃、37℃、56℃的冰箱和 电热培养箱中，处理时间分别为 1h、2h、3h，其中设 20℃为对照组。 (2) 将含裂头蚴的蛙肉分别放入不同浓度的酒精(20%、30%、40%、50%、60%) 及生理盐水中，分别浸泡 1h、2h、3h，其中将生理盐水组设为对照组。 (3) 将含裂头蚴的蛙肉分别放入 100%鸡胆汁、100%生姜汁、食用醋(总酸浓 度 4.5﹪，pH3.05)、食用酱油(含 19.3﹪NaCl)及生理盐水中分别浸泡 3h、6h、 12h、24h，其中将生理盐水组设为对照组 。 (4) 将含 20 条裂头蚴的蛙肉块放入匀浆搅拌机中进行处理 3min，将匀浆平 均喂饲小鼠 6 只。 经过以上处理后，所有实验组及对照组小鼠喂食饲料 1 周后处死，观察小鼠 体内的裂头蚴存活率。 结果： 1、小鼠动物模型建立及组织病理学改变：小鼠经口感染后，分别于第 2、4、 6、8、10 周剖杀小鼠发现：裂头蚴寄生部位大多为小鼠背部及腹部皮下,颈项部、 背部、腋部肌肉及腹腔内，而胸腔内及其他部位较少见。寄生数目 1～3 条不等， 裂头蚴较蛙体内大。肉眼观察可见寄生部位有弥漫性淤血瘀斑，少数还可见囊 包块形成等。HE 染色发现病变部位脂肪组织及横纹肌组织变性、坏死，中度纤 维组织增生并包绕脂肪组织，少部分血管纤维素样坏死等。另外，病变部位早 期是以中性粒细胞浸润为主的急性炎症，随着病程的进展，局部组织的损伤程 度不断加重，炎症范围不断扩大，并出现以淋巴细胞浸润为主的慢性炎症反应。 2、扫描电镜下，裂头蚴不分节，但有不规则的横皱褶。体前端无吸槽，顶 端中央有一横向孔向内凹陷，凹陷周围体壁呈唇状突起。体表的质膜内陷形成 大小不等的凹陷与沟纹，裂头蚴体表密布微毛；透射电镜下，裂头蚴的体壁由 皮层和实质区组成。微毛位于皮层的外表面，呈尖棘状。基质区内有许多形态 各异的颗粒状分泌小体、空泡、内质网及线粒体，其中线粒体多位于近基膜处。 实质区有表层肌、皮层细胞、实质细胞、成石灰小体细胞及排泄系统等分布， 并可见皮层细胞形成的胞质连接通过基膜伸向基质区。 3、(1) 裂头蚴经不同温度（-20℃、4℃、20℃、37℃、56℃）处理 1h 后 再感染小鼠，1 周后处死小鼠，各温度处理 1h 组与对照组（20℃处理 1h 组）感 染性的比较，均 P＞0.05；处理 2h 后，其中-20℃和 56℃处理 2h 时间组与对照 组（20℃处理 2h 组）比较，均 P＜0.05；处理 3h 后，其中-20℃、4℃和 56℃ 处理 3h 时间组与对照组（20℃处理 3h 组）比较，均 P＜0.05。 (2) 不同浓度的酒精（20%、30%、40%、50%、60%）和生理盐水分别浸泡含 裂头蚴的蛙肉 1h 后，其中 20%、30%和 40%处理 1h 时间组与对照组（生理盐水处 理 1h 组）感染性的比较，均 P＞0.05；处理 2h 后，除 20%组外，均 P＜0.05；3h 后，除 20%组外，均 P＜0.05。 (3) 100%鸡胆汁、100%生姜汁、食用醋、食用酱油和生理盐水分