南华大学医学院临床检验基础课件 第三章.ppt

60年代末：血细胞计数+HBG血红蛋白。 70年代：血小板+红细胞。 80年代：发展迅速，在8项检测基础上加上红细胞指数、三个直方图的报告。开发了白细胞三分群血细胞分析仪。 90年代：五分类血液分析仪+网状红细胞计数；同时，将激光、射频、化学染色计数应用于对细胞检测更成熟，发展成为血细胞分析流水线。 五分类血细胞分析仪的发展 五分类仪器的发展概要 完善对成熟细胞分析的方法学 – EO/BA、血小板 检测幼稚细胞 第一代：EO、BA分析 第二代：RETIC分析（全自动、分类） 第三代：其他幼稚细胞分析，血小板双方法 网络功能、扩展功能 HA的三大功能 经溶血素处理脱水后，血细胞体积大小发生了变化！ 第一群（35～90fl）小细胞区：淋巴细胞（体积最小）。 第二群（90～160fl）单个核细胞区，（中间细胞）：单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始、幼稚细胞、异常细胞等。 第三群（160fl以上）大细胞区：嗜中性粒细胞（体积最大）。 正常标本中红细胞与血小板体积相差较大，一般将红细胞与血小板的界限定于35fl，大的为红细胞，小的为血小板，也有以30fl或20fl为界限的。但在某些病理情况下可能有大血小板超过35fl界限，造成血小板漏计使结果偏低；反之，如果红细胞体积偏小(如缺铁性贫血，地中海性贫血)，则可能将部分小红细胞误计为血小板，使血小板计数偏高。为了结果准确一些，计数仪利用计算机在5-35fl间寻找直方图最低点，以此定为红细胞和血小板的界限。由此可使所计数的数值符合实际情况。因为各种细胞间的界限可以随细胞实际大小而向左或右移动，故称为浮动界标技术。 射频（radio frequency,RF） 指射频电流，是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波。 电导（electrical conductivity） 电的传送性能。 检测原理 高频电流能通过细胞壁，用高频电磁探针渗入细胞膜脂质层可测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质（如比例）、颗粒成分（如大小和密度）等特征性信息。 基本检测原理 流式细胞术光散射理论（Mie理论） 当2λ/π＜D＜10λπ时， S=F(λ，α，τ，φ，β) FCM术检测通道和光路系统 检测原理 Lambert-Beer定律：A=lg(I0/I) 被检物质吸收的单色光量与有色溶液的性质、厚度和浓度有关。 当液体性质和厚度固定后，吸光度与液体物质浓度成正比。 用于血红蛋白测定的溶血剂有2大类： ①改良氰化高铁血红蛋白溶血剂：测定波长为540nm，稀释液含氰化物成分。 ②非氰化高铁血红蛋白溶血剂：即稀释液不含氰化物成分。如SLS-Hb法，测定波长为555nm。经HiCN法校准后，既可达到与HiCN法相当的精密度和准确性，又可避免HiCN法的试剂对检验人员的潜在危害和对环境的污染。Sysmex XE-5000。 五、WBC系列参数检测原理 体积、电导和光散射法（VCS） FCM、电阻抗、射频和核酸荧光染色法 钨光源散射与细胞化学方法 多角度偏振光散射法 （MAPSS） 双流体（双鞘流）技术和细胞化学染色方法 1、体积、电导、散射（VCS）法 VCS检测原理 图示 VCS法 VCS细胞检测立体散点图 2、 FCM、电阻抗、射频和特殊细胞染色法 2-1 4DIFF通道：激光流式细胞术、核酸荧光染色技术 2-2 WBC/BASO通道 碱性溶血剂溶 解除B外的所 有细胞，然后 用FCM术计数B 用射频、电阻抗、细胞化学染色法：定量分析HPC、IG、BLAST、VL、NRBC、核左移 2-3 未成熟粒细胞信息（IMI） 3、 钨光源散射与细胞化学方法 3-1 过氧化物酶染色通道（POX） 3-2 嗜碱性粒细胞/分叶核检测通道 3-3 未染色大细胞计数（LUC） 4、多角度偏振光散射法MAPSS ０°前角光散射可粗略测定细胞大小 90°垂直光散射测C核分叶情况 90°消偏振光散射70°－110°，将E区分出来  双技术计数白细胞总数 1.MAPSS技术激光方法(WOC)计数白细胞总数。 2.电阻法原理（WIC）计数白细胞。 WOC和WIC差值大于10%的界限时，仪器将自动分析数据而选择一个准确的结果。 两种方法的同时采用可增加白细胞计数的可报告率以及灵敏度和警告标志的特异性，增强了鉴别病理或有问题的标本能力。 双技术计数在红细胞病理状态的应用 有核红细胞的区分：（NRBC） WIC利用溶血剂作用后计数核的数量来确认白细胞，而NRBC的存在使WIC增加。但