棉花再生体系建立及CarNAC5基因的遗传转化-作物遗传育种专业毕业论文.docxVIP

独 创 性 声 明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中 不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大 学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对 本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 关于学位论文使用授权的说明 本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新 疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文 档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论 文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编 入有关数据库进行检索，可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 棉花体再生体系建立及 CarNAC5 基因的遗传转化 摘 要 棉花作为世界性重要的经济作物，其遗传改良工作一直被受世人关注。然而，棉花再生体系 的建立是制约棉花转基因技术能否成功的关键。棉花通过体细胞胚胎发生和植株再生比较困难，使 得新疆棉花转基因育种研究的发展只能依赖转化效率及遗传稳定性均不够理想的花粉管通道法。因 此建立一个高效、优良的棉花再生体系是促进转基因技术在棉花育种中广泛应用的先决条件。与其 它作物相比，棉花组织培养依然比较困难，主要表现在基因型的依赖性强﹑从愈伤组织高效率地转 化为胚性愈伤组织过程复杂、周期长﹑胚发生率很低、再生品种少、畸形苗多、生根困难，基因转 化率低和转基因棉花农艺性状的变异等限制因子。 针对上述存在的诸多问题，本研究以四种新疆棉花栽培品种(新海 25、新海 16、新陆早 39 号和 新陆早 42 号)为试验材料，对其体细胞胚胎发生和植株再生体系进行了研究，建立了相应的体细胞 再生体系，并以陆地棉品种中棉所 44 号胚性愈伤组织为受体，通过农杆菌介导法进行 NAC 转录因 子的遗传转化并获得了转化再生植株。为今后新疆海岛棉抗旱分子育种奠定了基础。本研究主要结 果如下： 1.以海岛棉和陆地棉无菌苗下胚轴为外植体，通过愈伤组织诱导时期激素的配比，筛选海岛棉 和陆地棉愈伤诱导最适宜培养基，研究结果表明：陆地棉愈伤诱导最适培养基为 MSB 添加 0.1 mg/L KT 及 0.05 mg/L 2,4-D，愈伤组织诱导率达 90%以上；海岛棉愈伤组织诱导阶段的最佳条件为 MSB 添加 0.1 mg/L KT 及 0.1 mg/L 2,4-D，愈伤组织诱导率达 100%。 2.棉花胚性愈伤组织增殖培养基为 MSB 中添加 1.9 g/L KN03 并添加 1.8 g/L gelrite、0.1 g/L 天冬 酰胺、0.1 g/L 谷氨酰胺；体细胞胚形成的最适条件为 MSB 中 KNO3 加倍﹑去除 NH4NO3 并添加 2.0 g/L 凝固剂 gelrite、0.1 g/L 天门冬酰胺、0.1 g/L 谷氨酰胺及铺滤纸。成苗培养基凝固剂为 gelrite 优于琼 脂粉。 3.以中棉所 44 号胚性愈伤为外植体，通过农杆菌介导的转基因技术，获得转 NAC 转录子家族 的转化体系，并获得了转化再生植株。经卡那霉素筛选获得抗生小植株，通过 PCR 检测，初步证明 NAC 转录因子家族基因中的 CarNAC5 基因已转化到再生的棉花植株中；经过 PEG 胁迫条件下的 GUS 组织化学染色证实了 rd29A 启动子在转基因棉花中能够诱导 GUS 基因的表达。 关键词：海岛棉；陆地棉；再生体系；NAC 转录子家族基因；遗传转化 I PAGE PAGE IV III III Study on Plant Regeneration System of Cotton and Genetic Transformation of CarNAC5 Gene Abstract Cotton is as an important economical crop worldwide. Genetic improvement has been affected by the worlds attention. In the past century, significant improvments in yield and quality of cotton have been made through traditional breeding methods. Due to the lack of efficient cotton somatic embryogenesis and plant regene