酶切肽特异性靶向肿瘤改性纳米粒的制备及药效学研究-药学专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 浙江工业大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行 研究工作所取得的研究成果。除文中已经加以标注引用的内容外，本论文 不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得浙江 工业大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出 重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的 法律责任。 作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文 被查阅和借阅。本人授权浙江工业大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 本学位论文属于 1、保密□，在_ _年解密后适用本授权书。 2、不保密□。 （请在以上相应方框内打“√”） 作者签名： 日期： 年 月 日 导师签名： 日期： 年 月 日 浙江工业大学硕士毕业论文 浙江工业大学硕士毕业论文 酶切肽特异性靶向肿瘤改性纳米粒的制备 及药效学研究 摘 要 肿瘤靶向给药系统是将药物选择性地富集于靶组织、靶器官、 靶细胞或细胞内结构的给药系统。理想的肿瘤靶向药物传递系统不 仅将药物富集在肿瘤组织，同时还能将药物高效地传递到肿瘤细胞 内，从而使治疗效果最大化并减少药物的副作用。特异性肽链修饰 的两亲性聚合物是靶向给药系统开发的新方向，两亲性聚合物内核 能够包载亲酯性药物并保持其活性，实现主动靶向给药。本文以 MMP-2 特 异 性 切 割 的 肽 链 为 靶 向 设 计 合 成 了 两 亲 性 聚 合 物 MePEG-PePtide-PCL,以抗肿瘤药姜黄素为药物模型，制备具有靶向 性的姜黄素纳米粒。开展了纳米粒制备、特性考察工作，并对其抗 肿瘤活性进行了初步研究。主要内容如下： 1):建立姜黄素的体外分析方法。采用 HPLC 测定姜黄素含量， 并对方法专属性、回收率、精密度进行验证。结果表明 HPLC 法测定 药物含量方法可行，准确方便、稳定可靠，回收率和精密度均符合药 IV 物分析方法学要求。 2):亲水链段MePEG-COOH和MePEG-NHS的合成和表征。以聚 乙二醇单甲醚(MePEG，MP)和丁二酸酐(SA)为反应物，4-二甲氨基 吡啶为催化剂，在氮气保护下合成MePEG-COOH。之后用N-羟基琥 珀酰亚胺 、 N,N- 二 环 己 基 碳 二 亚 胺 活化 MePEG-COOH 生成 MePEG-NHS活性酯。MePEG-COOH和MePEG-NHS结构通过傅立叶 红外光谱 (FT-IR)和氢核磁共振谱 (1H-NMR) 进行验证，FT-IR 显示 MePEG-COOH、MePEG-NHS有特征吸收，1H-NMR则显示出丁二酸 的特征峰，证实聚合物结构得到预期的结果。同时采用正交试验对 MePEG-COOH制备过程中聚乙二醇单甲醚和丁二酸酐的投料比、催 化 剂 和 缚 酸 剂 (TEA) 的 用 量 进 行 优 化 。 结 果 表 明 最 佳 条 件 为 n(MP):n(SA)=1:2、n(MP):n(TEA)=1:1、催化剂用量为5%。 3):亲脂链段 PCL-NHtBoc 和 PCL-NH2 的合成及表征。以 ε-己内酯 (ε-CL)为原料、二乙基锌为催化剂、N-(叔丁氧羰基)乙醇胺作保护 剂，在无氧、无水条件下开环聚合生成 PCL-NHtBoc。 PCL-NHtBoc 脱 Boc 保护后得到氨基化 PCL-NH2。通过氢核磁共振谱(1H-NMR) 和凝胶色谱(GPC)对共聚物结构进行表征。1H-NMR 显示出聚合物的 特征吸收峰，证实聚合物得到预期结果。GPC 结果显示 PCL-NH2 分子量为 2206。 V 4): 载 姜 黄 素 纳 米 粒 的制备。 合 成 三 嵌 段 两 亲 性 聚 合 物 MePEG-PePtide-PCL , 以此为载体采用溶剂挥发沉淀法制备载姜黄 素 MePEG-PePtide-PCL 纳米粒(Cur-NPs)，并对载药纳米粒特性进行 了考察。结果显示载姜黄素纳米粒包封率为 65.25%，载药量为 1.07%， 平均粒径为 118.6nm，Zeta 电位为-4.30mV；透射电子显微镜（TEM） 观察纳米粒颗粒均匀，呈规则的椭球形。FT-IR 结果表明，姜黄素成 功地包埋于纳米粒中。 5):Cur-NPs 体外抗肿瘤活性研究。配制一系列的含 Cur-NPs 的 DMEM 细胞培养液，以宫颈癌 Hela 细胞为模型对其进行培养，通过 MTT 法测定细胞活性。结果显示在 0.625~20.0μg/mL 浓度范围内， Cur-NPs 对 He