慢病毒介导的RNAi沉默TLR4基因对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响-肿瘤学专业毕业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的： 探讨 TLR4 基因 RNA 干扰（RNAi）的重组慢病毒载体对人肝癌裸鼠移植瘤 TLR4 基因表达和移植瘤生长的影响。 方法： 1、构建 1 个阴性对照质粒和 2 个 miR-TLR4 质粒，选择干扰效果最明显的 质粒进行慢病毒包装用于裸鼠移植瘤实验。 2、建立人肝癌裸鼠移植瘤模型，随机分成实验组、阴性对照组和空白对照 组。隔天 1 次向各组动物移植瘤内分别注射 TLR4 miRNA 慢病毒颗粒、携带无 关序列的慢病毒颗粒或 0.9%氯化钠溶液 0.2 ml，共 5 次，且注射前测量各组移 植瘤体积的大小，并绘制裸鼠移植瘤生长曲线；11 天后处死裸鼠，将瘤体称重 并计算抑瘤率，并应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和 Western bolt 技术检测移植瘤中 TLR4 基因的表达。 结果： Western bolt 检测干扰效率显示，转染干扰片段 1、2 及阴性对照片段与对照 组相比，转染干扰片段 1 后，TLR4 蛋白表达量显著减少，即干扰片段 1 干扰效 果最明显(P0.05)。故将干扰片段 1 和阴性对照片段进行慢病毒包装。绘制裸鼠 移植瘤生长曲线显示，与空白对照组和阴性对照组相比，实验组移植瘤生长速 度明显减慢（P0.05）；空白对照组和阴性对照组相比，差异无统计学意义 （P0.05）。空白对照组和阴性对照组剥脱的瘤体瘤重分别为(2.32±0.03)g 和 (2.26±0.02)g，而实验组剥脱的瘤体瘤重为(0.95±0.02)g，实验组瘤体瘤重显著低 于空白对照组和阴性对照组，差异有统计学意义（P0.05），且瘤重抑瘤率达 （58.12±0.35）%；而空白对照组和阴性对照组瘤体瘤重相比，差异没有统计学 意义（P0.05）。并且实验组 移植瘤组织 TLR4 mRNA 和蛋白表达 明显下降 （P0.05）。 结论： TLR4 miRNA 慢病毒载体可抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长。 关键词：TLR4；肝癌；移植瘤；慢病毒载体；RNA 干扰 II Ab Abstract ABSTRACT Objective： To study the effects of the recombinant lentiviral vector for RNA interference (RNAi) of TLR4 gene on the expression of TLR4 gene and the growth of subcutaneous tumor of hepatocellular carcinoma in nude mice. Methods： Construct two miR-TLR4 plasmid and a negative control plasmid, and select a plasmid which has obvious interference effect for lentivirus packaging. BALB/C nude mice were inoculated subcutaneously with HepG3B cells to establish the subcutaneous tumor model of human hepatocellular carcinoma. The mice were randomly divided into experimental group, negative control group and blank control group. TLR4 miRNA lentiviral particles, lentiviral particles which carrying no effective sequence or NS(0.2 ml per time) were injected individually every two days. The volume of tumor of mice were measured. and the expression of TLR4 was detected by semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western bolt. Results： After transfecting interference fragment 1, TLR4 protein expression quantity was significantly reduced , and the interference effect of in