罗格列酮和肿瘤坏死因子α对脂肪细胞线粒体生物合成及ZAG表达的影响-内科学(内分泌)专业毕业论文.docxVIP

PAGE PAGE 2 罗格列酮和肿瘤坏死因子 α 对脂肪细胞 线粒体生物合成及 ZAG 表达的影响 硕士研究生：周 云 导 师：肖新华 中文摘要 目的： 观察罗格列酮和肿瘤坏死因子 α(TNF-α)对脂肪细胞线粒体生物合成和 ZAG 表达的影响。 方法： 体外培养 3T3-L1 前脂肪细胞并诱导分化为成熟脂肪细胞，分别以不同浓度 的罗格列酮和 TNF-α 干预 48h，提取总 RNA，采用 RT-PCR 方法检测 PGC-1α、 TFAM、NRF-1/2 及 ZAG mRNA 表达水平。在此实验的基础上，验证罗格列酮 和 TNF-α 对脂肪细胞线粒体合成相关因子及 ZAG 表达的影响，将分化成熟的脂 肪细胞随机分为四组：对照组、罗格列酮组(50μM)、TNF-α 组(30ng/mL)、罗格 列酮+TNF-α 组(RT 组)，采用 RT-PCR 和 Western Blot 技术检测 PGC-1α、TFAM、 NRF-1/2 及 ZAG mRNA 和蛋白表达；采用线粒体特异性染料 Mito Traker Green 预染成熟脂肪细胞，激光共聚焦显微镜下观察线粒体荧光强度；采用 ELISA 法 测定细胞培养液上清中 FFA 浓度。 结果： 1、罗格列酮单独干预分化成熟的 3T3-L1 脂肪细胞，ZAG 及 PGC-1α、 TFAM 、NRF-1/2 mRNA 表达水平均高于对照组(P0.01)； 2、TNF-α 单独干预分化成熟的 3T3-L1 脂肪细胞，ZAG 及 PGC-1α 、TFAM 、 NRF-2 mRNA 表达水平均低于对照组(P0.01)，且以 TNF-α 组(100ng/mL)降低最 为显著；TNF-α 组(10-100ng/mL)NRF-1mRNA 表达水平低于对照组(P0.01)，但 TNF-α 组(1ng/mL) NRF-1 mRNA 表达无显著差异(P0.05)； 3、罗格列酮(50μM)和TNF-α(30ng/mL)干预3T3-L1脂肪细胞48h，罗格列酮 组和罗格列酮+TNF-α组线粒体荧光强度高于对照组，而TNF-α组线粒体荧光强度 低于对照组； 4、罗格列酮(50μM)和 TNF-α(30ng/mL)干预 3T3-L1 脂肪细胞 48h，罗格列 酮组 ZAG、PGC-1α、TFAM、NRF-1/2 mRNA 表达水平均高于对照组(P0.01)； TNF-α 组 ZAG、PGC-1α、TFAM、NRF-1/2 mRNA 表达水平均低于对照组(P0.01)； 罗格列酮+TNF-α 组 ZAG、TFAM、NRF-2 mRNA 表达水平高于对照组(P0.01)， 而 NRF-1mRNA 表达水平低于对照组(P0.05)，PGC-1α mRNA 表达差异无显著 性(P0.05)； 5、罗格列酮(50μM)和 TNF-α(30ng/mL)干预 3T3-L1 脂肪细胞 48h，罗格列 酮组 ZAG、NRF-1 和 PGC-1α、TFAM 蛋白表达水平高于对照组(分别为 P0.05， P0.01)，NRF-2 蛋白表达差异无显著性(P0.05)；TNF-α 组 ZAG、NRF-1 和 TFAM、 NRF-2 蛋白表达水平低于对照组(分别为 P0.05，P0.01)，PGC-1α 蛋白表达著 差异无显性(P0.05)；罗格列酮+TNF-α 组 ZAG 和 PGC-1α 蛋白表达水平高于对 照组(分别为 P0.01，P0.05)，NRF-2 蛋白表达水平低于对照组(P0.01)，TFAM、 NRF-1 蛋白表达差异无显著性(P0.05)； 6、罗格列酮(50μM)和 TNF-α(30ng/mL)干预 3T3-L1 脂肪细胞 48h，罗格列 酮组 FFA 浓度低于对照组，TNF-α 组 FFA 浓度高于对照组，差异均有显著性 (P0.05)，罗格列酮+TNF-α 组浓度表达差异无显著性(P0.05)。 结论： 1）罗格列酮促进脂肪细胞ZAG和PGC-1α、TFAM、NRF-1/2 mRNA表达； 促进ZAG和PGC-1α、TFAM、NRF-1蛋白表达， 2）TNF- α减少ZAG和PGC-1α、TFAM、NRF-1/2 mRNA表达减少，ZAG和 TFAM、NRF-1/2蛋白表达， 3）罗格列酮促进线粒体脂肪酸β氧化功能恢复，降低FFA浓度；TNF-α减弱 线粒体脂肪酸β氧化功能，增加FFA浓度。 关键词：脂肪细胞；线粒体合成；锌 α2 糖蛋白；罗格列酮；肿瘤坏死因子 α Effects of rosiglitazone and tumor necrosis factor-α on mitochondrial biogenesis and ZAG expression in adipocytes Abstrac