黄连麦冬提取物对体外培养大鼠结膜杯状细胞增殖作用及有效成分配伍筛选的实验分析-中西医结合临床 (眼科)专业毕业论文.docxVIP

成都中医药大学硕士学位论文 成都中医药大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 中 文 摘 要 目的：（1）建立 SD 大鼠结膜杯状细胞（Rat Conjunctival Goblet Cells，RCj-GCs） 体外常规培养模型；（2）观察黄连麦冬五种提取物干预 RCj-GCs 48h 的增殖活性； （3）观察有效成分配伍对 RCj-GCs 分别干预 24h 和 48h 的增殖活性；（4）观察 有效成分配伍对 RCj-GCs 干预 48h 细胞周期的影响；（5）观察有效成分配伍对 RCj-GCs 干预 48h 细胞粘蛋白分泌的影响。 方法：（1）组织块原代培养法培养细胞并用组化和免疫组化鉴定细胞；（2）将五 种实验药：黄连多糖（CP）、黄连生物碱（CA）、麦冬多糖（DLP）、麦冬高异黄 酮（DLI）、麦冬皂苷（DLS），分别溶解并稀释为 8 个实验组，终浓度分别为 10mg/ml、 5 mg/ml、1 mg/ml、0.2 mg/ml、0.04 mg/ml、0.008 mg/ml、0.0016 mg/ml、0.00032 mg/ml，通过 MTT 法检测 8 个组对 RCj-GCs 干预 48h 的增殖活性；（3）MTT 法 检测有效成分配伍对 RCj-GCs 干预 24h 和 48h 的增殖活性；（4）流式细胞仪检 测配伍干预 RCj-GCs48h 细胞周期的变化；（5）以考马斯亮蓝 G-250（CBBG） 染色法检测配伍干预 RCj-GCs48h 细胞粘蛋白分泌量的变化。 结果:（1）原代培养 7-10 天能够培养出 RCj-GCs，经 AB/PAS 双染和免疫组化鉴 定为 RCj-GCs。（2）CP1mg/ml、DLI1mg/ml 和 DLP0.00032mg/ml 对 RCj-GCs 增 殖活性明显高于对照组（P0.01）。（3）配伍各组对 RCj-GCs 干预 24h 增殖活性 明显高于阴性对照组和阳性对照组（P0.01）；组Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ对 RCj-GCs 干预 48h 的增殖活性明显高于阴性对照组（P0.01）；组Ⅰ对 RCj-GCs 干预 48h 的增殖活 性明显高于阳性对照组（P0.01）；组Ⅲ对 RCj-GCs 干预 48h 的增殖活性明显高 于阳性对照组（P0.05）。（4）各个配伍组均未明显促 RCj-GCs 凋亡；组ⅠG2/M 期和组Ⅲ S 期的细胞比例高于阴性对照组（P0.05）；组ⅠS 期细胞比例高于阴 性对照组（P0.01）；组ⅠG2/M 期细胞比例高于阳性对照组（P0.05）。（5）各 配伍组干预 RCj-GCs48h 细胞粘蛋白分泌量与对照组比较无明显差异（P0.05）。 结论：（1）体外成功建立 RCj-GCs 常规培养模型，并鉴定为 RCj-GCs；（2） CP1mg/ml、DLI1mg/ml 和 DLP0.00032mg/ml 对 RCj-GCs 有良好的促增殖作用； （3）配伍组Ⅰ和Ⅲ有良好的促 RCj-GCs 增殖的作用；（4）配伍组Ⅰ和Ⅲ能够促 进细胞有丝分裂和增殖；（5）配伍各组对细胞粘蛋白的分泌无明显抑制作用。 关键词：大鼠结膜杯状细胞（RCj-GCs）；黄连；麦冬；提取物；干预；配伍； 增殖；细胞周期；粘蛋白。 Abstract Purpose: （1）Establish SD Rats Conjunctival Goblet cells (Rats Conjunctival Goblet Cells, RCj-GCs) in vitro conventional cultivating model;（2）Observation coptidis and dwarf lilyturf five extract intervene RCj-GCs 48h the cell proliferation activity（; 3）Observation compatibility of effective ingredients intervene RCj-GCs 24h and 48h respectively the cell proliferation activity;（4）Observation Compatibility group intervene RCj-GCs 48h cell cycle effects;（5）Observation Compatibility group intervene RCj-GCs 48h for cellular proteins secreted effects. Methods: （ 1 ） Tissue mass primary culture cells, characterization cells