抗肿瘤硫色满酮衍生物的可能作用靶点—微管蛋白和Toll样受体-药物化学专业毕业论文.docxVIP

摘 要 摘 要 微管是细胞骨架的主要组成成分，在维持细胞形态和细胞有丝分裂中起着至关重要 的作用。尤其是在细胞的有丝分裂过程中，当细胞进入分裂期后，由微管解聚成的微管 蛋白参与纺锤体的装配。任何干扰微管蛋白聚合和解聚功能活性的药物都会妨碍细胞周 期，从而引起细胞的凋亡。因此以微管为作用靶点一直是抗癌药物研究的热点。 Toll 样受体(TLR)是一类模式识别受体，通过多种信号传递改善免疫系统功能，活 化 NF-κB 信号通路，调节 TNF-α、ILs 和 IFN-α等多种细胞因子分泌。已证实几种 TLRs 的激动剂具有抗肿瘤作用，如 imiquimod，resiquimod。 本文将通过两个途径对新型的硫色满酮类化合物的抗肿瘤作用靶点进行探讨，一方 面以微管为作用靶点进行研究，另一方面以 TLRs 激动剂效应为出发点进行探讨。 首先从猪脑组织中纯化出微管蛋白，并采用 BCA 法检测微管蛋白的初始浓度，然 后用 SDS电泳法对其进行鉴定，再通过浊度法和电镜超微结构观察法两种方法综 合评价提取的微管蛋白的聚合-解聚的功能活性，同时以典型的微管抑制剂紫杉醇和秋 水仙碱作为阳性对照药物证明了提取出的微管蛋白的功能活性良好。本研究发现 (z)-3-(氯代亚甲基)-6-甲基-硫色满-4-酮（CMMT）、(z)-3-(氯代亚甲基)-6-氟-硫色满-4- 酮（CMFT）、(z)-3-(氯代亚甲基)-6-氯-硫色满-4-酮（CMCT）、(z)-3-(溴代亚甲基)-6- 氟-硫色满-4-酮（BMFT）和(z)-3-(氯代亚甲基)-6-甲氧基-硫色满-4-酮（CMMOT）都能 够抑制微管蛋白的聚合。探讨此类化合物是否具有 TLRs 激动剂作用的实验证实 CMFT 具有类 LPS 作用，可激活小鼠腹腔巨噬细胞，提高分泌 TNF-α、IL-6 和 IL-12 水平，提 示其可能是 TLRs 的激动剂。 本研究表明，类似化学结构的CMMT、CMFT、CMCT、BMFT和CMMOT有着同秋 水仙碱相似的作用都能够抑制微管蛋白的聚合；CMFT可能是TLRs的激动剂，具有类LPS 作用，能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞中TNF-α、IL-6和IL-12水平。本研究结果表明新型 硫色满酮抗肿瘤化合物的可能作用靶点是微管蛋白和TLRs，进一步通过各种实验确认这 一结果，对研究探讨硫色满酮类化合物的抗肿瘤作用机制具有重要意义。 关键词 微管蛋白 硫色满酮类衍生物 TLRs agonist TNF-α IL-6 IL-12 I Abstract Abstract Microtubules constitute the major components of the cytoskeleton and play crucial roles in the cell morphology and mitotic spindle assembly. Especially in the process of cell mitosis, when cells enter the split phase, the tubulin depolymerized by microtubule involved in the spindle assembly. Any drugs with interfering tubulin polymerization and depolymerization will prevent the cell cycle, causing apoptosis. Therefore, the microtubule targets has been the hot topics in the study of anticancer drugs. Toll-like receptors (TLRs) is a kind of pattern recognition receptors, TLRs can improve immune system function, activate NF kappa B signaling pathways, predominate regulating TNF alpha, interleukins, interferons alpha and a variety of cytokine secretion through a variety of signal transmission. The naturally powerful immunostimulatory property of TLR agonists can be exploited for active immunotherapy