利用邻位连接技术检测花生过敏原成分-食品研究与开发.PDF

２０16 年 5 月 食品研究与开发 第 37 卷第 9 期 Ｆood Research And Development 检测分析 148 DOI ：10.3969/j .issn.1005-6521.2016.09.034 利用邻位连接技术检测花生过敏原成分 1 1 1 1 2 2 1 2 1，* 张霞 ，赵 良娟 ，高琳 ，温华蔚 ，王飞雪 ，董焱 ，刘掘茫 ，刘寅 ，郑文杰 （1. 天津出入境检验检疫局 ，天津 300461；2. 南开大学 ，天津 30007 1） 摘 要 ： 建立一种新型花生过敏原成分的快速筛选检测方法--邻位连接技术检测方法。针对花生过敏原选择适 当的鼠 源单克隆抗体 ，并合成针对花生过敏原的兔源多克隆抗体然后与磁颗粒偶联 ，而后将羊抗兔二抗与一条 DNA 分子耦联 制成亲和探针 1，将另一条寡核苷酸序列与羊抗鼠二抗耦联制成亲和探针 2 ，上述成分能够与一连结 DNA 组合成邻位 连接复合物 ，建立邻位连接检测花生过敏原的方法。使用 3 种花生过敏原标准品和 10 种确定不含花生过敏原的样本进 行特异性试验 ；通过稀释花生过敏原标准品进行灵敏度验证 。建立方法具有很好的特异性 ；检 测标准品的灵敏度 为 0.0 1 ng/mL ，比普通 ELISA 试剂盒灵敏度提 高了 1 000 倍 。建立的邻位连接检测花生过敏原的方法能够检测 出使 用 目前 常规方法不能检测到的花生过敏原 ，具有重要的实际意义。 关键词 ： 花生过敏原 ；邻位连接 ；亲和探针 ；磁颗粒 A Proximity Ligation Assay of Peanut Allergen 1 1 1 1 2 ZHANG Xia ， ZHAO Liang-juan ， GAO Lin ， WEN Hua-wei ， WANG Fei-xue ， 2 2 2 1，* DONG Yan ， LIU Jue-mang ， LIU Yin ， ZHENG Wen-jie （1. Tianjin Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau ，Tianjin 300461，China ； 2． Nankai University ， Tianjin 30007 1， China ） Ａｂｓｔｒａｃｔ ： To establish a new method with high -sensitivity for detection of peanut allergen-proximity ligation assay. The proximity ligation assay compound consists of monoclonal antibody from mouse to peanut allergen ， polyclonal antibody from rabbit to peanut allergen ， secondary antibody goat anti -mouse ， secondary antibody goat anti - rabbit ， DNA nucleotide probe 1 and 2 ， DNA connector. Three kinds of pea