分子生物学大实验(2).pptx

分子生物学大实验生物技术专业2010年08月;课程特点：;课程要求：;分子生物学主要技术;实验操作内容 实验准备：药品配制及培养基制备 实验1：植物总DNA的提取 实验2：质粒DNA的连接、转化与筛选 实验3：质粒DNA的提取及酶切检测 实验4：PCR 实验5：琼脂糖凝胶电泳（在实验1、3、4中进行）;实验一：琼脂糖凝胶电泳;一、琼脂糖和琼脂糖凝胶： 琼脂糖是D-和L-半乳糖残基通过α（1→3）和（1 → 4）糖苷键交替构成的线状聚合物。 琼脂糖凝胶可以构成一个直径从50nm到略大于200nm的三维筛孔的通道。;二、下述因素决定DNA在琼脂糖凝胶中的迁移速率： DNA分子大小： 双链DNA分子在凝胶中迁移的速率与其碱基对数的常用对数成反比。分子越大，迁移越慢。 琼脂糖浓度： 给定大小的线状DNA片段在不同浓度的琼脂糖凝胶中迁移速率不同。浓度越高，迁移越慢。;DNA构象： 超螺旋环状、切口环状和线状DNA在琼脂糖凝胶中以不同速率迁移。（主要取决于琼脂糖凝胶的浓度和类型，还有电流强度、缓冲液离子强度和超螺旋程度） 大多数情况，主要区别未处理的环状DNA样品和单一位点经限制酶作用线状化的同一DNA样品。 凝胶和电泳缓冲液中的溴化乙锭： 溴化乙锭插入双链DNA造成其负电荷减少、刚性和长度增加，因此，线状DNA-染料复合物在凝胶中的迁移率约降低