课件：蛋白质的共价结构.ppt

（2）其他序列测定法（了解） 酶降解 法 序列 ABCDEFGHIJK--- 酶解 AB，CD，EF，GH，IJ， K－ Edman循环后再酶解 BC，DE，FG，HI，JK，--- 质谱法 其它测定方法 利用外切蛋白水解酶(exo-peptidase) 将肽链的氨基酸从N端(aminopeptidase)或C端(carboxypeptidase)一个接一个游离出来，在不同时间取样进行分析，根据所游离的氨基酸的摩尔数的多少来判断氨基酸的排列顺序。 酶解法肽小片段测序 酶解法末端测序 质谱法 Edman循环后看分子量的变化 质谱法 一般测定步骤 8、确定肽段在多肽链中的次序。 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。P179 蛋白质一级结构的测定 一般测定步骤 9、二硫键位置的确定。（了解） 蛋白质一级结构的测定 1、为防止Cys跟Cys-Cys发生交换反应，先 将自由SH基封闭。 2、进行专一性部分水解 3、纸层析分离水解产物 4、气相过甲酸法切断S-S键，作第二相纸层 析 5、将迁移率发生变化的多肽进行测序 经典的二硫键位置的确定法 二硫键位置确定 一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链， 再利用双向电泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将每个肽段进行组成及顺序分析， 然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置。 二硫键位置的确定 蛋白质测序举例 1953年，英国Sanger等，牛胰岛素 （1）5.7Kd （2）两条链：A（21AA），B（30AA） （3）A，B间有两个二硫键，A链上有一链内二硫键 The relationship between the amino acid sequences of protein and its function 蛋白质一级结构与功能关系的特点是: A 相同氨基酸组成的蛋白质功能一定相同 B 一级结构相近的蛋白质其功能类似性越大 C 一级结构中任何氨基酸的改变,其生物活性就丧失 D 不同生物来源的同种蛋白质.其一级结构完全相同 E 一级结构中氨基酸残基任何改变,都不会影响其功能 *镰刀状红细胞贫血症 四、蛋白质的序列与生物学功能 （自学） 1.The function of a protein depends on its amino acid sequence Each separate type of protein has a unique amino acid sequence. Each of the ~3000 different proteins in an E.coli cell, the ~100,000 ones in a human being has a different amino acid sequence. Proteins of different functions always have different amino acid sequences. Genomic annotation is assigning functions to genes based on sequence information. Many human genetic diseases have been traced to the deficiency of a single enzyme or protein. The deficiency of many such enzymes are found to be caused by a single change of amino acid residue, indicating protein functions are determined by their amino acid sequences. Proteins that have similar functions but from different species are found to be very similar in amino acid sequences. (cytochrome c, myoglobin, etc.) sequence homology as a basis for phylogenetic trees. 2.Many proteins have variations in their amino acid sequences i