茅台酒对大鼠肝纤维化及肝硬化并肝癌组织Klf6及相关基因表达影响的研究-病理学与病理生理学专业毕业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2013 届硕士研究生论文 PAGE PAGE 10 茅台酒对大鼠肝纤维化及肝硬化并肝癌组织 Klf6 及相关基因表达 影响的研究 专业：病理学与病理生理学 研究生：孙江龄 导师：何常 教授 摘要 目的 探讨大鼠肝纤维化及肝硬化并肝癌组织中 Klf6 基因，TGF-β1，p21， α-SMA 表达的规律，研究它们的表达状态与酒精性肝病并肝癌的关系，探讨长 期饮用国酒茅台较少发生 ALD 并肝癌的机制。 方法 雄性 SD 大鼠 130 只，分 5 组：正常组 10 只，茅台酒高、低剂量组和 白酒高、低剂量组各 30 只。单纯酒造模期，2、4、6 月末各组随机处死 2 只大 鼠，动态观察各组大鼠肝脏组织病理学变化。单纯灌酒 6 个月后，以黄曲霉素 B1 进行肝癌短期模型复制。采用免疫组织化学方法检测大鼠肝脏组织中 Klf6， TGF-β1，p21，α-SMA 的表达。应用 RT-PCR 技术检测大鼠肝脏组织中 Klf6 蛋 白 mRNA 表达情况。 结果 免疫组化结果显示 Klf6，p21 在肝细胞胞核呈阳性反应，TGF-β1，α-SMA 在肝细胞胞浆中呈阳性反应，Klf6，p21 在茅台酒组的阳性表达率高于白酒组， 差异有统计学意义(P＜0.05)；TGF-β1，α-SMA 在白酒组的阳性表达高于茅台酒 组，差异有统计学意义(P＜0.05)。RT-PCR 结果显示，Klf6 蛋白肝组织中 mRNA 表达茅台酒组高于白酒组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 1、长期适量饮用茅台酒，发生 ALD 并肝癌的机率较普通白酒的机率 低，其发生可能与 Klf6，p21 基因的功能并未受到抑制，可能与非依赖 p53 途径 介导的细胞凋亡功能有关。2、在 ALD 并肝癌中，TGF-β1 与 α-SMA 扮演着重要 的角色。3、相同致病因子条件下，饮酒摄入的剂量、饮酒的种类可能使 ALD 并 肝癌的发病存在差异性。4、所有的酒类对肝脏均有损伤作用，具体与酒精的剂 量和质量有关。 关键词：肝纤维化 肝癌 Klf6 前言 酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)是指长时间大量酒精的摄入导致的 肝脏病变。ALD可以从脂肪肝进行到肝纤维化，酒精性肝炎和肝硬化，最后发展 成为肝癌[1]。随着生活水平的逐步提高及消费水平的上升，酒精消费也随着逐年 增加，导致ALD患者数量居高不下，已成为我国继病毒性肝炎后最高发的肝脏疾 病，也是需要医学工作者攻坚的一个难题。目前认为影响ALD的因素较多，主要 与种族、性别、地域、酒精摄入种类、摄入量、摄入年限、摄入方式、肝炎病毒、 营养状况、遗传等相关。据中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组[1] 发布的最新ALD诊疗标准中，包含有长期饮酒史，一般超过5年，折合乙醇量男 性大于等于40g/d，女性大于等于20g/d，或2W内有大量饮酒史，折合乙醇量大于 80g/d，可见酒精摄入量及时间与ALD的重要关系。近年来国酒茅台因奇独特的 成分引起了相关专家的注意，有研究发现：茅台酒对ALD及肝癌的作用较其他酒 相对致病性小。 正常情况下，酒精进入体内后经胃、小肠吸收。通过血液进入肝脏，在肝脏 内通过乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase, ADH)将乙醇氧化成乙醛，乙醛经乙醛 脱氢酶(Aldehyde Dehydrogenase, ALDH)代谢为乙酸而经尿排出体外。酒精性肝 病由于一次性大量饮酒或长期慢性摄入酒精性饮品，超过了肝脏解毒能力，而导 致血液和肝脏中大量的酒精及乙醛蓄积[2]。ALD发生时，肠粘膜通透性改变引起 内毒素血症，内毒素可以一方面直接作用肝细胞，另一方面通过激活库普弗细胞 （Kupffer cell, KC） 释放一系列生物活性物质引起ALD[3]。 KLF6(Kruppel-like factor 6, KLF6)是Krupple样因子家族的一员，KLF6又称 ZF9/CPBP，为锌指转录因子9/核心启动子元件结合蛋白，属于普遍表达的锌指 转录因子[12]。KLF6基因定位于人类染色体10p15，全长约7 kb，含4个外显子， 突变通常发生于第2、3外显子。其编码的蛋白含283个氨基酸，包括N-端转录活 性功能域(201个氨基酸)和C-端锌指结构域(82个氨基酸)。N-端功能区富含脯氨酸 和丝氨酸等酸性氨基酸残基，与转录活性有关，调控下游基因的表达。C-端结构 域含有3个连续C:H:型锌指结构域，与KLF转录因子家族其他成员保持高度同源 性。C:H:型锌指结构域能特异性结合靶基因启动子区域的GC盒、CACCC盒等核 心元件，直接作用于DNA，调节靶基因的转录。此外，它还参与蛋白之间的相 互作用，间接影响下游基因转录。KL