抗高效氯氰菊酯家蝇品系的交互抗性及其相关酶的活性研究-环境科学专业毕业论文.docxVIP

山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 目 录 摘 要I AbstractIII 文献综述1 1 家蝇的概述 1 2 家蝇的抗药性及产生机制 2 2.1 家蝇抗药性现状3 2.2 家蝇的防御体系4 2.3 家蝇的行为抗性5 2.4 家蝇的生理抗性6 2.5 家蝇的代谢抗性8 3 抗药性与适合度代价的关系 12 4 抗药性与同工酶的关系 13 5 拟除虫菊酯抗性家蝇的交互抗性 15 6 家蝇抗药性的防制 19 实验部分23 第一部分 抗高效氯氰菊酯家蝇品系的培育及对 3 种杀虫剂的交互抗性23 1 高效氯氰菊酯抗性家蝇品系的培育 23 2 抗高效氯氰菊酯家蝇品系对 3 种杀虫剂的交互抗性 25 第二部分 家蝇品系随抗性的增长对 3 种酶性质变化影响30 1 高效氯氰菊酯对谷胱甘肽过氧化物酶氧化物酶（GSH-PX）的影响 30 2 高效氯氰菊酯对乙酰胆碱酯酶（AChE）性质的影响 34 3 高效氯氰菊酯超氧化物歧化酶（SOD）性质的影响 37 第三部分 家蝇品系随抗性的增长对家蝇羽化率的影响 42 第四部分 在不同杂交情况下对家蝇抗性衰退的影响45 参考文献49 附录一：考马斯亮兰蛋白测定试剂盒说明书54 附录二：谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒说明书55 附录三：乙酰胆碱酯酶(AChE)酶测定试剂盒说明书56 附录四:超氧化歧化酶(SOD)酶活测定57 致 谢59 研究生期间发表的论文60 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 抗高效氯氰菊酯家蝇品系的交互抗性及其相关酶的活性研究 摘 要 本文以家蝇为实验对象，通过实验的前期准备，熟悉了家蝇的饲养方法及 抗性培育方法，并采用点滴法性作为抗性培育及生物测试的方法。实验所用的 家蝇敏感品系是山东疾病控制预防中心昆虫饲养室长期饲养的，抗性培育是从 实验室 内 饲 养 的 敏 感 品 系 （ S ） 开 始 ， 所 使 用 的 杀 虫 剂 为 高 效 氯 氰 菊 酯 （beta-cypermethrin）。对抗性培育家蝇的采用点滴法进行抗药性倍数的测定后， 并选择不同抗性水平的家蝇对其他三种杀虫剂进行抗性倍数的测定，以观察抗 高效氯氰菊酯抗性家蝇对其他杀虫剂的交互抗性。实验观察记录了家蝇抗药性 培育的结果；统计了不同抗性水平家蝇对其他三种杀虫剂的交互抗性的变化； 并测量了不同抗性水平家蝇体内 GSH-PX、AChE、SOD 活性的变化，并对相关 酶的同工酶的电泳谱带进行分析；观察了不同抗性水平家蝇的羽化率的变化； 最后观察了不同杂交条件下对家蝇抗性衰减的影响。 通过对家蝇品系 26 代的抗性培育，家蝇的抗性倍数从敏感品系（S），到 F26 代时抗性倍数达到 152.9079，抗性家蝇抗性水平已经达到高抗水平，这对家 蝇的防制产生了较大的困难。 在家蝇的抗性培育过程中，分别对抗性选育的 F5、F10、F16、F22 和 F26 家蝇 品系对溴氰菊酯（deltamethrin）、敌敌畏（DDVP）和残杀威（propoxur）3 种 杀虫剂的抗性倍数的测定。结果显示，抗高效氯氰菊酯家蝇在 F26 时抗性倍 数增长了 44.8196 倍，存在明显的交互抗性；对 DDVP 的抗性倍数到 F26 时 增长了 8.7899 倍，有交互抗性；对残杀威，抗性倍数保持在 1 倍左右，在 F26 时，抗性倍数最低，为 0.6074 倍，存在负交互抗性。由此可以得出，拟除虫菊 酯类抗性家蝇对同类的药剂存在明显的交互抗性，对有机磷杀虫剂有一定的交 互抗性，对氨基甲酸酯类杀虫剂存在负交互抗性。这些结果对于选用具有负交 互抗性杀虫剂防制家蝇有指导作用。 为检测抗性选育的家蝇品系对家蝇体内酶的作用，分别对不同抗性水平家 蝇的 GSH-PX、AChE 和 SOD 三种酶进行了酶活的测定，结果显示，家蝇体内 I 的三种酶的酶活均发生了较大的变化。GSH-PX 随着家蝇抗性的增长，活性逐 渐增强，在 F26 时达到最高，相对活性达到 236.55%，其 POD 同工酶酶谱带颜 色均有加深趋势，特别是 PX3 和 PX4 条带在 F18 达到最深，说明酶表达量增加， 活性加强，因此可以看出 GSH-PX 作为重要的解毒酶系，活性增强与抗性的增 长有关；AChE 作为重要的靶标酶系，随着家蝇抗性的增高，AChE 活性降低， 因此表现为靶标不敏感，有利于降低杀虫剂的危害，在酯酶同工酶酶谱中，E1 和 E3 颜色逐渐加深，而 E5 条带颜色变浅，甚至消失，说明酯酶同工酶结构性 质有所改变；SOD 作为昆虫体内重要保护酶系，家蝇的抗性增长的同时，SOD 活性逐渐增强，到 F26 时到达最强，相对活性达到 297.35%，活性增加了近 3 倍， SOD 活性增强有利于消除家蝇体内氧自由基，达到