生物化学试验.PDFVIP

《细胞生物学实验》部分 由汤华编写 2007 年 5 月 目 录 第二部分 细胞生物学实验2 实验一 细胞大小的测量2 实验二 细胞膜的渗透性5 实验三 线粒体的活体染色与观察7 实验四 线粒体的分离制备与观察9 实验五 植物液泡的活体染色与观察12 实验六 叶绿体的分离与荧光观察14 实验七 细胞内过氧化物酶的观察17 实验八 细胞内含物的观察19 实验九 细胞骨架的光学显微镜观察23 实验十 植物原生质体分离和活性鉴定26 实验十一 聚乙二醇法诱导的细胞融合29 实验十二 细胞中DNA的Feulgen染色观察31 实验十三 DNA和RNA的甲基绿-派洛宁原位染色法35 实验十四 植物染色体结构与Giemsa分带技术37 实验十五 染色体核仁组织区的银染法41 实验十六 细胞凋亡的检测44 实验十七 染色体荧光原位杂交技术47 附录 1 细胞生物学实验室守则53 附录 2 细胞生物学染色技术55 附录 3 生物绘图与临时装片知识57 附录 4 实验报告的书写59 参考资料60 1 第二部分 细胞生物学实验 实验一 细胞大小的测量 【实验目的】 1.学会测微尺的使用和计算方法。 2.学习和掌握测量细胞大小的基本方法。 【实验原理】 细胞长度、宽度、面积、体积的测量，是研究细胞生理活动和形态特点的重要手段。应 用显微镜的成像原理，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测 量和运算，可得出细胞的大小。 图 1 目镜测微尺和镜台测微尺 目镜测微尺（ocular micrometer ）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm 长度刻成 50 等 分，或把 10mm 长度刻成 100 等分，每 5 小格间有一长线相隔。测量时，将其放在接目镜 中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不 同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜 测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下， 目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺（stage micrometer ）是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm 等 分为 100 格，每格长 l0 μm （即0.0lmm ），是专门用来校正目镜测微尺每格长度的。 校正时，将镜台测微尺放在载物台上，镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大， 从镜台测微尺上得到的读数就是真实的尺寸大小。由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位 置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放 大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺， 换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量，即可得到细胞的大小。 2 表 1 目镜测微尺量测倍率比照表 物镜倍数 目镜倍数 一格单位(μm) 4