日本血吸虫循环抗原成分的分析-四川动物.PDFVIP

日本血吸虫循环抗原成分的分析 王秀珍 黎世涛 张声海 周蕊 王稚秋 周贤坤 胡忠勤 (四川省寄生虫病防治研究所) 血吸虫宿主体内存在着多种成分组成的抗原谱。既往研究较多的，在电泳中出现于 染小鼠尿液中的三种循环抗原均为虫源性，其中两种为不耐热和不溶于三氯醋酸的未知 成分。目前许多学者用三氯醋酸提取的循环抗原免疫动物，仅能查出循环抗原中的一 种，这可能是过去检查循环抗原方法敏感性不高所致。究竟宿主体内有几种循环抗原及 (1981)等对多糖抗原研究的基础上，对活虫、活卵进入宿主血循环的分泌代谢产物进 行了分析，以期提供一种检测循环抗原的新的诊断试验。 材 料 与 方 法 一、循环抗原的制备 (一)成虫分泌代谢抗原 解剖经尾蚴感染42天的家兔，用无菌生理盐水冲虫，选择雌雄合抱完整的成由于新 鲜台氏液中，按每瓶10对培养24小时。合并培养液，浓缩后离心除去沉淀。用蒸馏水透 析除盐后，低温保存备用。 (二)活卵分泌代谢抗原 取经1500条尾蚴感染42天的家兔肝脏，分纯虫卵，用无菌蒸馏水按压积体积1％ 3 (V／V)比例，所含虫卵数为2471个／mm ，于三角烧瓶内培养6小时，放4℃冰箱中 过夜，离心沉淀，取上清液浓缩备用。 (三)三氯醋酸提取抗原 成虫浸出液或感染5000条尾蚴30天家兔血清，滴加等量15％的预冷三氯醋酸搅拌30 分钟，用G3 玻砂漏斗抽滤去沉淀，无蛋白滤液用流水透析除去三氯醋酸，用0.01M pH 7.4的PBS透析平衡。加4倍体积无水乙醇放4℃冰箱过夜，3000rpm离心15分钟去上 清液，沉淀用无水乙醇洗涤两次，乙醚洗涤一次，真空干燥备用。 二、分析方法 10 (一)蒽酮法测多糖，Lowry改良酚试剂法测蛋白，地衣酚试剂法定量核糖核 酸。 (二)聚丙烯酰胺凝胶电泳 用上述电泳法进行蛋白质、多糖、核酸组分的分离。用考马斯兰染蛋白质，Schiff 氏法染多糖和糖蛋白，用苏丹黑染脂蛋白，用派洛宁染核糖核酸。 1．区分含蛋白的多糖和多糖的方法：将经聚丙烯酰胺凝胶电泳后的凝胶条置于具塞 带相对应者为糖蛋白，与考马斯兰染色对应不着色者为多糖。染色后鉴定电泳图谱。 2．用凝胶等电聚焦和聚丙烯酰胺园盘电泳确定循环抗原中蛋白质组分及其等电点 范围。 3．用琼脂免疫电泳，聚丙烯酰胺交叉免疫电泳确定各组分的抗原性。 4．用聚丙烯酰胺凝胶电泳同时分离趋阳极和趋阴极抗原。方法如下：在长约12cm直 抗原的样品胶约1cm，再于另一端聚合7.5％分离胶5cm，按常规方法电泳。 结 果 定量培养的血吸虫代谢抗原分析结果表明：平均每对雌雄合抱的成虫24小时代谢具 有抗原性物质30.55微克，其中多糖占代谢总量的7.8％，蛋白质占77％，核糖核酸占 15.2％。分别将这三大类物质与高感染兔血清和抗成虫抗原血清作对流免疫电泳和双向 扩散试验均产生沉淀线，而与抗血吸虫卵血清均不产生沉淀线。每1000个活卵培养6小 时，代谢具有抗原性物质为0.72微克，其中多糖占46％、蛋白质占28％、核糖核酸占 26％。见附表。虫卵代谢抗原与抗卵血清产生明显沉淀线，而与抗成虫抗原血清不发生 沉淀线。 成虫代谢抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳后，用考马斯兰R250染色可显示16条区带，经 凝胶等电聚焦电泳后用考马斯兰G250染色可显示在等电点5.53～6.9之间有11条区带。 见图I。苏丹黑染色的脂蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳后的胶条上只有一条区带。对照染 色胶条，切下未染色的胶条上脂蛋白部分与抗循环抗原血清作琼脂扩散试验，可见一条 明显沉淀线。 两条区带为含蛋白的多糖成分。用派洛宁染色有一条区带。 三氯醋酸提取的循环抗原在趋阳极端有一条红色区带，阴极端有2条红色区带，对 照考马斯兰染色胶条证明为多糖组分。 峰。成虫代谢抗原与抗循环抗原血清在聚丙烯酰胺凝胶交叉免疫电泳中可形成6个沉淀 血吸虫虫卵代谢抗原可分出6条多糖区带，16条