利用果蝇模型研究pygo新型信号途径-遗传学专业毕业论文.docxVIP

摘 摘 要 wg／Wnt信号在心脏发育和心脏衰老过程中发挥重要的作用。 pygo作为Wm信号途径的一个新成员，依赖于Wm信号调控心脏发 育。本研究室的最新结果表明，敲低pygo表达导致严重的成体心脏 功能突变表型，而敲低Wnt／B．catenen．TCF信号成员的表达导致的突 变表型，明显低于pygo的表型水平或无表型。另一方面，TCF的显 性负突变引起与pygo表型一致的严重成体心脏生理功能缺陷，提示 pygo调控成体心脏功能不依赖于经典Wm信号，可能依赖与TCF类 似因子相互作用而发挥功能，存在新的调控机制。因此，利用果蝇心 衰模型，探究新型的pygo分子调控途径成为了我们的研究重点。 为了探究pygo在果蝇成体心脏中的分子调控机制，本文采用了 染色质免疫共沉淀结合高通量测序(CHIP—seq)的方法鉴定pygo基 因调控成体心脏功能的新靶点，首先，运用成体心脏功能分析系统验 证了pygo在维持成体心脏功能中的重要功能。其次通过果蝇杂交实 验构建了心脏特异性(hand 4．2 Gal4)驱动UAS-HA-pygo过表达标 签稳定系，采用免疫荧光实验方法证明了HA抗体的有效性，检测到 Pygo蛋白在心管的表达。同时，剥取过表达果蝇品系心管，用甲醛 交联，并用超声波将其打断成一定长度的小片段，取一部分染色质作 为Input，其余分别加特异性HA抗体，以及阴性对照IgG抗体，解 交联，纯化DNA，最后对文库DNA进行验证、质检、高通量测序。 测序后对结果进行多方面处理，去污染及接头、将测序转化为可视化 万方数据 数据：通过MACS方法追踪到799个重要基因组特征峰值，并对其 数据：通过MACS方法追踪到799个重要基因组特征峰值，并对其 基因结构进行了分类，使用最新的UCSC浏览器对数据进行结构和 功能注释；对峰值信号进行GO富集聚类分析，Pygo相互作用基因 的功能主要定位在染色体结构变化和修饰过程中；分析转录起始位点 TSS附近的峰值分布特征并对三个重复样品进行启动子峰值交叉分 析，找到120多个代表基因；并对三个重复样品进行信号通路分析， 定位到11条重要的信号通路。通过综合分析我们初步定位到26个 Pygo蛋白可能调控的候选基因。目前，候选基因的鉴定还在进一步 进行中。 关键词：pygo基因，心脏功能，分子机制，ChIP．Seq 万方数据 AB AB STRACT The wingless／Wnt signaling pathway plays critical roles in the regulation of cardiac development and dysfunction．The pygo gene is a new member of the canonical Wnt(wingless)signaling pathway and it was reported to be a regulator in cardiac development through Wnt signaling．Our Research Center showed that knockdown of pygo’S expression severely blocked adult heart physiological activities，however, knockdown of Wnt／beta--catenen··TCF signals was significantly weaker phenotype or even has non—phenotype．Reminding that pygo functions on adult heart were independent of Wnt signaling．But on the other， TCF-like mediators may cooperate wim this function，since a TCF dominant negative mutation(TCF-DN)severely blocked adult heart physiological activities and performed the similar phenotype as pygo．Thus，what we focus on is to explore the new molecular regulation of pygo by using the model of drosophila． In order to explore the molecular regulation mechanism of pygo in Drosophila，we mainly us