山羊分娩期子宫颈PGE2合成来源及其受体分布和相关mRNA表达的分析-临床兽医学专业毕业论文.docxVIP

山东农业大学硕士学位论文 山东农业大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 2 2 中文摘要 子宫颈是雌性动物维持妊娠和启动分娩的重要器官，宫颈成熟不仅是一个主动的生 化过程而且是一个炎症反应，有许多介质都参与了宫颈成熟，如前列腺素、孕酮、松弛 素等。前列腺素 E（PGE2）在哺乳动物生殖过程中具有广泛多样的生理作用，PGE2 的 受体分为 EP1、EP2、EP3 和 EP4 四种亚型。本课题利用 Western blot、免疫组化和荧光定 量 RT-PCR 的方法进行试验，探讨了山羊分娩时子宫颈 PGE2 的合成来源、受体分布及 其 PTGS2、PTGER2 和 PTGER4 mRNA 的相对表达量。 尽管前列腺素 E2（PGE2）被认为是子宫颈成熟过程的重要介质，但 PGE2 引起子宫 颈成熟的机制及在该部位的合成来源仍不清楚，部分原因是缺乏关于子宫颈 PGE2 合成 及其 EP 受体的精确细胞定位。为了重新了解子宫颈成熟机制，我们利用免疫组化和间 接免疫荧光技术对发情周期、妊娠期和分娩期的山羊子宫颈 EP2 和 EP4 受体蛋白的表达 以及 PGE2 的合成进行定位，并通过油红 O 检测证明不同时期的子宫颈是否存在脂肪细 胞；同时采用 SYBR Green I 实时荧光定量 RT-PCR 检测了前列腺素 E2 合成酶（PTGS2）、 前列腺素 E2 受体 EP2 亚型（PTGER2）、前列腺素 E2 受体 EP4 亚型（PTGER4）mRNA 在山羊三个不同生理时期（分娩时、妊娠中期、空怀期）的相对表达水平。结果发现分 娩期山羊子宫颈 EP2 和 EP4 受体广泛分布于子宫颈管粘膜上皮、血管、环形和纵形平滑 肌以及基质上；发情期子宫颈中粘膜上皮纤毛和腺管上皮强烈表达 EP2 受体蛋白，基质 中也散在表达 EP2 和 EP4 受体。分娩期子宫颈粘膜上皮细胞、肌细胞、血管内皮细胞、 基质中各种细胞以及脂肪细胞均可以合成 PGE2，而发情前期、后期和间情期以及妊娠 期子宫颈两种受体的表达以及 PGE2 合成均为阴性。山羊分娩时子宫颈组织中 PTGS2、 PTGER2 和 PTGER4 mRNA 相对表达水平均明显高于妊娠中期、空怀期，且差异极显著 （P0.01），其中妊娠中期相对表达水平最低。分娩期山羊子宫颈中出现脂肪细胞，并 能分泌 PGE2，且荧光定量结果显示 PTGS2、PTGER2 和 PTGER4 mRNA 相对表达量与 前列腺素 E2 合成量及其 EP2、EP4 受体分布相一致。此外，分娩期子宫颈肌纤维断裂、 纤维间出现许多胶胨样物质、血管扩张、间质水肿和白细胞浸润等，这些变化符合分娩 期的炎症过程，并有助于平滑肌松弛和子宫颈扩张。PGE2 合成细胞和含量的改变以及 EP2 和 EP4 舒张性受体分布的变化促进了山羊子宫颈的扩张。 关键词：山羊；子宫颈；前列腺素 E2；免疫组化；荧光定量 RT-PCR 山羊分娩期子宫颈 PGE2 合成来源及其受体分布和相关 mRNA 表达的研究 The study on the synthetic origin and receptor distribution of PGE2 and its related mRNA expression during the parturient period of goat Abstract Cervix is an important organ that maintains gravidity and carries out the delivery in the female animal, cervical ripening is not only an active biochemistry process, but also an inflammatory reaction as there are a lot of media have participate in cervical ripening, such as prostaglandin, progesterone, relaxin etc., Prostaglandin E2 (PGE2) exerts a wide variety of physiological actions in mammalian reproduction, PGE2 receptors are classified into four subtypes, EP1, EP2, EP3 and EP4. PGE2 synthetic source and receptor distribution and relative express quantity