重度子痫前期胎盘小动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的改变.docVIP

重度子痫前期（sever preeclampsia，SPE）是妊娠期高血压疾病 的一种。其在血压和蛋白尿的表现为：血压大于160/110mmHg,尿蛋 白2.0g/24小时或者蛋白尿大于等于++。其重要的基本变化在心血管表 现为：正常的生理性孕晚期孕妇全身血容量增加大概1500ml，而在重 度子痫前期患者本应增加的血容量可能因血管的收缩而缺如。最终导 致胎儿宫内缺血、缺氧、生长受限[4]。多数病例在妊娠期出现一过性 高血压，蛋白尿症状，分娩后随即消失。其对母儿的健康危害极大， 遂引起大量学者的广泛关注。胎盘在妊娠期中具有合成、代谢、以及 防御等复杂的功能，是维持胎儿在子宫内进行物质交换的部位。妊娠 晚期胎儿血以每分钟500ml的流量流经胎盘。胎儿能从母体获得充足 的氧份。受多种因素的影响，如心功能不全，血红蛋白值低，肺功能 不良，母血中氧分压均明显降低而不利于胎儿。目前其发病原因在胎 盘的主要病理变化表现为，胎盘滋养细胞浅着床、胎盘体积缩小、绒 毛减少、绒毛内血管发育不良、间质纤维化、胎盘缺血、缺氧等。子 痫前期、子痫时绒毛血管常发生闭塞性内膜炎，血管合体膜增厚，加 之母体血流量减少，胎儿获氧明显不足，容易发生胎儿窘迫[5]。根据 胎盘滋养叶细胞缺血氧学说，胎盘血管重铸障碍是导致子痫前期患者 滋养叶胞缺氧的关键[6]。有运用彩色多普勒检测妊娠期高血压患者子 宫动脉及胎儿脐动脉血流发现：子宫-胎盘、胎盘-胎儿血液循环障碍， 子宫动脉及脐动脉阻抗增高，血供不足[7]。 有研究报道发现，妊娠期高血压疾病患者胎盘小动脉血管平滑肌 细胞膜钾电流密度比正常妊娠组减小，静息膜电位比正常妊娠组大。 9 推测妊娠期高血压疾病可能与钾通道功能的改变有关[8]。但在此研究 过程中未能对钾通道进行分类，对引起妊娠期血压升高的通道类型未 能进行区分和定位。是否因为BKCa通道在妊娠期高血压疾病状态下其 功能发生了改变而影响了整个细胞膜上的钾电流密度，以及子痫前期 患者BKCa通道的功能是否发生了改变，国内外还未见报道。本实验尝 试以两步法急性酶进行组织的消化获得适合膜片钳实验的人胎盘小 动脉血管平滑肌细胞。单通道膜片钳记录方式检测重度子痫前期患者 胎盘小动脉血管平滑肌细胞BKCa通道的电流幅值、总开放概率、平均 开放时间、平均关闭时间，与正常血压患者胎盘小动脉血管平滑肌 BKCa通道进行比较。了解在SPE患者BKCa通道的功能是否发生了改 变，进行进一步的探讨SPE与离子通道间的关系，期望对该病的发病 机理和治疗提供一定的理论基础。 10 材料与方法 1 研究对象 纳入标准 病例组 选取 2012年 6月至 2013年 2月在泸州医学院附属医院产科确 诊为重度子痫前期并终止妊娠的孕妇 10例，年龄 20~34 岁，血压≥ 160/110mmHg，蛋白尿：++-++++ 孕周：37.3±4.1 周 对照组 选取同期在本科室终止妊娠的 10例正常孕妇作为对照组，年龄 19~34 岁，平均血压 124.45±9.92/80.17±8.27mmHg；孕周 37.1±3.8 周 所有研究对象的诊断标准参照乐杰主编第七版《妇产科学》，并 均自愿签署知情同意书。 排除标准 排除既往患有炎症性疾病、癌症、严重肝肾功能损害、免疫性 疾病、内分泌疾病、吸烟史、孕期大量服药史以及精神或认知异常者 等。 排除多胎妊娠、前置胎盘、胎盘早剥等其他高危妊娠。 单通道膜片钳实验试剂、溶液、酶液、仪器 单通道膜片钳主要试剂 11 F 型胶原酶，木瓜蛋白酶，白蛋白，DTT, HEPES，K-aspartate，和 IbTX 购自美国 Sigma 公司，其他为国产试剂 单通道膜片钳溶液的配制 溶液Ⅰ（mM） pH 用 NaOH 调至 7.40、HEPES10、glucose12、KCl5.9、CaCl22.4、 NaCl127、MgCl21.2 用于组织及细胞的保存和分离 溶液Ⅱ（mM） pH 用 NaOH 调至 7.40、HEPES 10、MgCl2 1.2、KCl 5.9、glucose 2。 NaCl 127 用于细胞的保存和分离 单通道电极液（mM） pH 用 KOH 调至 7.20-7.40、EGTA 2、KCl 100、HEPES 10、K-aspartate 40 单通道浴液（mM） pH 用 KOH 调至 7.20-7.40、KCl 40 、K-aspartate 100 、EGTA 1 、 HEPES 10 按单通道膜片钳要求加入CaCl2，采用下列公式计算浴液中游离 钙离子浓度 Add[Ca2+]=(1+K’([EGTA]+[ Ca2+]free)×[ Ca2+]free)/(1+[ Ca2+]free×K’) 公式中Add[Ca2+]为加入浴液中CaCl2