生物工程专业试验指导-制药与生物工程-沈阳化工大学.PDF

生物工程专业实验指导 沈阳化工大学生物工程教研室 2017.1 主编：朱建星 编委：丁 琳、王红艳、关丽杰 朱建星、陈若飞、李海燕 邵 双、张万忠 目录 生物工程专业实验室规章制度 生物工程专业实验室规章制度 1 生物工程专业实验Ⅰ 1 一、基因工程实验——大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒 DNA 分子导入原核细胞 1 二、细胞工程实验4 实验一 细胞工程实验室设置与仪器设备4 实验二 培养基的制备 7 实验三 植物原生质体的分离 10 实验四 常春藤茎段的离体培养 15 实验五 百合芽苗的增殖培养 17 三、生化分离实验——菠萝蛋白酶的提纯及分子量的鉴定 19 实验一 菠萝蛋白酶的初级纯化及鉴定 19 实验二 果实菠萝蛋白酶的动力学测定24 实验三 凝胶层析法脱盐和离子交换柱层析纯化菠萝蛋白酶27 实验四 提纯的菠萝蛋白酶的分子量的鉴定—SDS 31 生物工程专业实验Ⅱ 39 一、链霉素产生菌的诱变育种及发酵生产模拟 39 实验一 灰色链霉菌的活化 39 实验二 灰色链霉菌的产孢培养40 实验三 抗生素对孢子致死曲线的测定41 实验四 链霉素产生菌的诱变及抗生素抗性筛选43 实验五 链霉素效价标准曲线的测定45 实验六 抗生素抗性菌株的液态发酵及链霉素高产菌株的筛选47 实验七 发酵罐的操作及控制48 二、离子交换法提取链霉素 51 三、AS1.398 中性蛋白酶发酵条件的优化 54 四、双水相萃取AS1.398 中性蛋白酶 57 实验一 双水相萃取相图的绘制 57 实验二 双水相萃取牛血清白蛋白 58 实验三 PEG/(NH ) SO 双水相萃取 AS1.398 中性蛋白酶 60 4 2 4 实验四 PEG1000/柠檬酸钠双水相体系萃取 AS1.398 中性蛋白酶 62 五、离子交换法分离中性蛋白酶 63 六、枯草杆菌碱性磷酸酶反应动力学的研究 66 七、壳聚糖微球固定化中性蛋白酶 73 八、壳聚糖微球固定化中性蛋白酶水解酪蛋白 76 九、固定化脂肪酶催化合成乙酸丁酯 79 1、多胺化壳聚糖固定化载体的制备 79 2、固定化酶的制备 80 3、固定化脂肪酶水解活力的测定 80 4、制备乙酸丁酯 80 十、离子交换树脂吸附精制肝素 82 十一、秦皮中七叶苷/七叶内酯的提取、分离和鉴定 85 十二、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG ）的高效液相色谱分析检测 87 附录 1 实验室常用玻璃器皿的清洁方法 89 附录2 常用缓冲溶液配制方法 93 生物工程专业实验室规章制度 凡进入实验室工作的教师和学生必须遵守以下规则： １.各不同层次的实验室都承担有不同的课程，本室内都配备有相应的常规实 验设备，实验技术人员应经常保养好自己管辖范围内的仪器、设备，发 现问题及时处理解决，以免影响正常教学的进行。 ２. 课程老师必须熟悉该室的仪器、设备。各方面都应按照严谨的科学态度 严格要求，认真指导学生正确使用各种仪器设备。每次大型仪器使用完 毕后，老师须督促学生登记。 ３. 实验室内的精密仪器，学生使用时必须严格按照操作步骤进行，不得随 意搬动或擅自动手检修。操作过程中遇到问题，学生应向老师提出，得