蓝舌病病毒VP7和VP2蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备-动物医学;预防兽医学专业毕业论文.docxVIP

Classified Classified Index： Code：10224 Confidential(yes／no)：no NC．：】206 1 0453 Dissertation for the Master Degree Prokaryotic Expressio．n of VP7 and VP2 of Bluetongue Virus and Preparation of Monoclonal Antibodies C andidate：Liu Qi Supervisor：Professor Li Yijing Degree C ategory：Master of Agriculture College：College of Veterinary Medicine First level discipline：Veterinary Medicine Second level discipline：Preventive Veterinary Medicine Harbin China June 2015 万方数据 目 目 录 摘要 1 英文摘要 ．．III 1引言 ．1 】．1蓝舌病病毒概述 】 1．1．1 BTV的病原学特性 ．．1 1．1．2 BTV的基因组结构与特征 ．．1 1．1．3 BTV编码的主要蛋白及其功能 2 1．1．4 BT的流行史和特点 ．4 1．1．5 BT的临床症状和病理变化 ．5 1．1．6 BT疫苗的研究 ．5 1．2 BT的实验室诊断技术 ．： ．．6 1．2．1病毒的分离鉴定 6 1．2．2血清学诊断方法 7 1．2．3分子生物学诊断方法 8 1．3研究的目的和意义 9 2材料与方法 ．．10 2．1试验材料 ．．10 2．1．1载体 。10 2．1．2细胞、病毒及血清 ．10 2．1．3试验动物 10 2．1．4试验中用到的引物 一 ．10 2．1．5主要试剂 ．11 2．1．6主要试剂配制 1 1 2．1．7主要仪器设备 ．12 2．2试验方法 ．．13 2．2．1目的基因的扩增 13 2．2．2重组原核表达系统的构建 ．15 2．2．3重组VP7和分段VP2蛋白的表达及鉴定 16 2．2．4 VP7和Ⅵ，2蛋白的纯化 ．17 2．2．5实验动物的免疫 ．17 2．2．6间接ELISA检测方法的建立 】7 2．2．7细胞融合 ．17 2．2．8阳性杂交瘤细胞株的筛选与克隆 ．19 2．2．9杂交瘤细胞的冻存和复苏 ．1 9 T 万方数据 东北农业大学农学硕士学位论文2．2．10单克隆抗体的生物学特性鉴定 东北农业大学农学硕士学位论文 2．2．10单克隆抗体的生物学特性鉴定 20 3结果 22 3．1目的基因的扩增结果 22 3．2重组表达质粒的鉴定结果 23 3．3重组VP7和分段VP2蛋白的SDS．PAGE鉴定结果 25 3．4重组蛋白的Western blot鉴定结果 ．31 3．5间接ELISA检测方法的建立 ．．32 3．6杂交瘤细胞株的筛选 34 3．7单克隆抗体的生物学特性鉴定 34 3．7．】单克隆抗体的Western blot鉴定 34 3．7．2间接免疫荧光试验 ．36 3．7．3单克隆抗体的亚类鉴定 ．37 3．7．4杂交瘤细胞染色体数的鉴定 ．37 3．7．5单克隆抗体叠加试验 ．39 3．7．6单克隆抗体的特异性试验 ．39 3．7．7杂交瘤细胞分泌单抗的稳定性检测 ．39 4讨论 41 4．1重组VP7和分段VP2一蛋白的构建及表达 ．．41 4．2制备单克隆抗体的重要环节 41 4．2．1动物免疫 ．41 4．2．2细胞融合 一42 4．2．3单克隆抗体的克隆筛选 42 4．3制备的单抗在BT检测中的潜在应用价值 ．43 5结论 一44 驾【谢 ．45 参考文献 ．46 攻读硕士学位期间发表的学术论文 ．53 Il 万方数据 CoNT￡NTSCoNTENTS CoNT￡NTS CoNTENTS Abstract in Chinese．．．．．．．．．．．．．． ．． ．．．．．．． ．．．． ．． ．．．．． ．．．． ．．．．．．． ．．． ．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．． ．．．．．．． ．．．．．1 Abstract in English II】 1 Introduction．．．．．． ．．． ．．．．．．． ．． ．．．．． ．．． ． ．．．． ．． ．． ．．．．．． ．．． ．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．1 1．1 Overview of Bluetongue virus ．．1 1．1．1 Pathogenic charactemstics ofBTV．． ．．．．．． ．．．．． ．