栝楼桂枝汤治疗脑卒中后肌肉痉挛的药效物质基础研究-中西医结合临床专业毕业论文.docxVIP

2．实验方法 2．实验方法 44 3．实验结果 44 4．{寸论 ．．52 5．结论 ．52 第四章栝楼桂枝汤调节BBB通透性改善脑卒中后肌肉痉挛初步机制研究53 1．实验材料 54 2．实验方法 54 3．实验结果 56 4．讨{念 ．．60 5．结{念 ．．6l 12；论 ．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62 参：考文献 ．．63 l咐录 68 致谢．。．。．。。．．。．．．。．。．．．。。。．．。．。．．．．。．．．．。。。．。。。。．。。．。．。．．．．．。．．．．．．．。．。．。。．。．．．．。。．．．．。．69 文献综述 ．。70 作者简历 ．77 万方数据 英汉缩略词表 英汉缩略词表 万方数据 中文摘要背景： 中文摘要 背景： 脑卒中，具有患病率高、致残率高、死亡率高等特点。脑卒中后肌肉痉挛是其常见 的后遗症，严重影响患者的康复和日常生活能力。目前临床上针对脑卒中后肌肉痉挛的 药物，相对匮乏。中医对中风病的认识源远流长，在治疗慢性、多因素的复杂疾病中显 示出良好的疗效优势。栝楼桂枝汤，处方来源于《金匮要略》卷上，由栝楼、白芍、桂 枝、生姜、甘草及大枣六味药物组成，具有解肌祛邪，舒缓筋脉。主治太阳柔痉体强证。 课题组前期临床研究发现，栝楼桂枝汤对治疗中风后肢体痉挛有较好的疗效，然而其药 效物质基础尚不明确。本课题获得了福建省科技厅重点项目(项目编号：2012Y0041) 的支持。 目的： 本课题旨在阐释栝楼桂枝汤治疗脑卒中后肌肉痉挛的药效物质基础，探讨其脑靶向 优势，为复方药效物质基础研究和脑源性疾病的多靶点治疗提供有力的科学数据支持。 方法： (1)采用液愿联用方法，对栝楼桂枝汤中的两种氨基酸(瓜氨酸和Y．氨基丁酸) 及其他24种活性成分进行分析、测定。 (2)采用大脑中动脉栓线阻断法制备局灶性脑缺再灌注损伤模型(MCAO)，缺血2 h后进行再灌注，分析测定MCAO模型大鼠的神经行为学、脑梗塞面积、病理组织形态、 脑脊液内神经递质含量变化，探讨栝楼桂枝汤治疗脑卒中后肌肉痉挛的药效作用。 (3)采用超高效液相色谱．质谱联用(UPLC．MS)方法，分析检测栝楼桂枝汤给药 后脑缺血再灌注模型大鼠的入脑成分。采用气相色谱一质谱联用(GC．MS)方法，分析 检测栝楼桂枝汤给药后脑缺血再灌注模型大鼠的入脑的挥发性成分。 (4)采用伊文思蓝染色方法，观察给药后BBB通透性的变化；采用免疫组织化学 技术，检测脑组织中紧密连接蛋白ZO一1、Claudin一5、水通道蛋白AQP．4蛋白的变化；采 用ELISA方法，检测脑组织中基质金属蛋白酶MMP．2、MMP．9的变化。 结果： (1)分别建立了HPLC—MS、UPLC．MS／MS法测定栝楼桂枝汤中两种氨基酸(瓜氨 酸和Y一氨基丁酸)及其他24；f00活性成分(没食子酸、原儿茶酸、氧化芍药苷、儿茶素、 对羟基苯甲酸、没食子酸甲酯、香草酸、芍药内酯苷、芍药苷、4一羟基肉桂酸、甘草苷、 VI 万方数据 紫云英苷、3．羟基肉桂酸、异甘草苷、2．羟基肉桂酸、甘草素、酸枣仁皂苷A、肉桂酸、甘草酸、6一姜酚、甘草查尔酮A、8一姜酚、6一姜烯酚、甘草次酸)的含量的测定方法。 紫云英苷、3．羟基肉桂酸、异甘草苷、2．羟基肉桂酸、甘草素、酸枣仁皂苷A、肉桂酸、 甘草酸、6一姜酚、甘草查尔酮A、8一姜酚、6一姜烯酚、甘草次酸)的含量的测定方法。 (2)药效学结果表明，在神经功能症状评分方面，栝楼桂枝汤低、中、高剂量组第 7天评分低于MCAO模型组(P0．05)；在运动功能障碍发面，与模型组比较，栝楼桂枝 汤低、中、高剂量组，功能障碍评价分数明显升高，有显著性差异(PD．町)；在脑梗 死体积方面，MCAO模型组与栝楼桂枝汤中、高剂量组比较有显著性差异(PO．05)；在 脑组织病理方面，给药组与MCAO模型组相比，病理改变明显减轻。虽出现神经元变性、 坏死，组织水肿，细胞排列散乱，核溶解及胞核固缩等现象，但程度和数量均较MCAO 模型组减少。在氨基酸类神经递质方面，与模型组比较，栝楼桂枝汤高剂量组能降低脑 组织内氨基酸类神经递质(天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸)含量。 (3)通过UPLC．MS方法，在灌胃给药后模型大鼠的脑脊液和脑组织中鉴定出11个 成分(瓜氨酸、没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、芹糖甘草苷、 甘草苷、芹糖异甘草 苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草酸)；通过GC．MS方法，在栝楼桂枝汤复方中 共鉴另1J93个挥发性成分，并初步鉴定出54个挥发性入脑成分。 (4)在脑组织EB含量方面，与MCAO模型组相比，