三氧化二砷对视网膜色素上皮细胞增殖、移行和凋亡的影响-眼科学专业毕业论文.docxVIP

温州医学院硕士学位论文中文摘要 温州医学院硕士学位论文 中文摘要 目的：探讨三氧4L二石申(arsenic trioxide，As203)聂J表皮-K：[]z子(epidermal growth factor，EGF)诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞增 殖和迁移的影响，及其对RPE细胞凋亡的影响以及可能的作用机制。 方法：将药物终浓度为0、O．5、1．0、2．0、5．0、1 0．0和20．0¨mol／L的As203分别 加入到无血清、含10ng／ml EGF和10％血清培养的ARPE．19细胞培养液中，培 养24h和48h，通过MTT比色法检测药物对ARPE．19细胞活性的影响，从而观 察As203对ARPE．19细胞的药物毒性作用，对EGF诱导的ARPE．19细胞增殖的 影响，对10％血清培养下的ARPE．19细胞活性的影响，筛选安全、有效的药物 浓度；通过划痕和Transwell实验检测As203对EGF诱导的ARPE．19细胞迁移 的影响；通过Hoechst 33342和TUNEL实验检测As203诱导ARPE．19细胞凋亡 的作用；采用荧光染料H2DCF—DA和荧光探针JC．1分别检测As203作用于 ARPE．19细胞12h后细胞内活性氧和线粒体跨膜电位的变化情况。 结果：MTT检测发现：在作用24h和48h后，通过与对照组的OD值进行比较， 0．5～5．0“mol／LAs203对ARPE一19细胞活性无明显的影响(24h：F=0．858，P=0．521 0．05；48h：F=0．720，P=0．5980．05)。同时0．5~2．Ol上mol／LAs20s对lOng／ml EGF 诱导的ARPE．19细胞增殖亦无明显影响(24h：F=I．380，P=0．3170．05；48h： F=1．030，P=0．4290．05)，而5．0-20．0}tmol／L As203对EGF诱导的ARPE．19细 胞增殖具有明显的抑制作用。5．09rnol／L As203对血清培养的ARPE．19细胞作用 24h后，细胞活性开始表现出明显的下降，其降低了33％。而作用48h后，细胞 活性下降了48％。划痕实验的结果显示：0．5~2．0pmol／LAs203对lOng／ml EGF诱 导的ARPE．19细胞横向迁移具有抑制作用。Transwell的实验结果表明 O．5～2．01amol／L As203对10ng／ml EGF诱导的ARPE．19细胞纵向迁移有明显的抑 制作用，其抑制率分别为22％、33％和46％。Hoechst 33342检测发现As203作 用血清培养的ARPE一19细胞24h后，部分细胞出现核浓缩，产生凋亡小体等形 态学变化，而未加药组细胞无明显变化。TUNEL法显示无血清且未加药组 ARPE．19细胞呈现绿色荧光的阳性率为(2．90士0．28)％，含血清但未加药组为 (3．97士0．21)％，含血清且加药组为(33．26士3．96)％，加药组与未加药组比较 有统计学意义(★P0．01)。5．01．tmol／LAs203对血清培养的ARPE一19细胞作用12h 后，细胞内ROS含量增加，线粒体跨膜电位降低。 6 温州医学院硕士学位论文结论：As203能够显著抑制EGF诱导的ARPE．19细胞增殖和迁移，并能通过线 温州医学院硕士学位论文 结论：As203能够显著抑制EGF诱导的ARPE．19细胞增殖和迁移，并能通过线 粒体凋亡途径诱导血清培养的ARPE．19细胞发生凋亡。 关键词：三氧化二砷；视网膜色素上皮细胞；表皮生长因子；细胞增殖：细胞迁 移；细胞凋亡 温州医学院硕士学位论文Abstract 温州医学院硕士学位论文 Abstract objective To explore the effect of arsenic trioxide(As203)on EGF—induced proliferation and migration of retinal pigment epithelium(RPE)cell，and the potential mechanism ofAs203 induced RPE cell apoptosis． Methods Different concentrations ofAs203(0，O．5，1．0，2．0，5．0，10．0，20．0 pmol／L) were used to treat ARPE-1 9 cell with or without 1 0ng／ml EGF in serum-free group， and ARPE一1 9 cell cultured in 1 0％fetal bovine serum(FBS)