量子点标记的呼吸道合胞病毒活细胞内动态输运途径示踪分析-分析化学专业毕业论文.docxVIP

基金资助本论文得到国家重点基础研究发展计划：量子点标记技术研究病 基金资助 本论文得到国家重点基础研究发展计划：量子点标记技术研究病 毒侵染过程及宿主应答(编号：2011CB933600)的资助，在此表示衷 心的感谢。 万方数据 目录摘要 目录 摘要 ： ．．I ABSTRACT． ． ． ． ． ．． ． ． ．． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．． ． ．．． ．1、， 第1章论文选题依据及研究内容 1 1．1论文选题依据 1 1．1．1研究意义 ．1 1．1．2研究现状 。- ． ．2 1．1．2．1病毒侵染宿主细胞的主要机制 2 1．1．2．2荧光标记病毒成像在研究病毒侵染途径方面的应用 4 1．1．2．3量子点在生物成像领域的应用 8 1．2研究目标、研究内容、以及拟解决的关键科学问题 ．．． 13 1．2．1研究目标 13 1．2．2研究内容_ 13 1．2．3拟解决的关键科学问题 13 1．3技术路线 ． 。14 第2章组氨酸标签原位修饰病毒的量子点标记 ．．15 2．1前言 。： ．15 2．2实验部分 1 5 2．2．1实验仪器 j ．1 5 2．2．2 NTA-Ni修饰量子点 ．．16 2．2．3 HEp．2细胞复苏和传代培养 ．． 16 2．2．4 RSV的扩增 ．1 7 2．2．5原位多肽标记病毒 1 7 2．2．6标记病毒免疫荧光分析 1 8 2．2．7病毒滴度分析 ．．． 1 8 2．3结果与讨论 ．18 2．3．1 NTA-Ni修饰量子点的表征 ．．1 8 2．3．2 His6修饰HEp一2细胞成像 20 万方数据 2．3．3 2．3．3 His6标记RSV成像 20 2．3．4 His6标记病毒与病毒免疫荧光共定位分析 21 2．3．5 His6和量子点标记对病毒感染力的影响 22 2．4小结 一23 第3章利用量子点及核酸染料的病毒原位双色标记 25 3．1前言 ．． 25 3．2实验部分 26 3．2．1实验仪器 26 3．2．2 HEp．2细胞培养 ．27 3．2．3 I峪V的扩增 27 3．2．4标记病毒的制备 ．27 3．2．5双标病毒细胞成像 ．27 3．2．6病毒滴度分析 28 3．2．7标记病毒免疫荧光分析 28 3．2．8一步生长曲线测定 28 3．3结果与讨论 29 3．3．1 RSV扩增时间考察 29 3．3．2细胞生物素化的表征 29 3．3．3细胞生物素化对细胞和病毒增殖的影响 30 3．3．4生物素标记病毒 ． 32 3．3．5生物素标记及QDs标记对病毒感染力的影响 33 3．3．6单病毒示踪分析病毒侵染早期行为 36 3．3．7原位双色标记病毒 37 3．3．8双标病毒监测RSV核酸释放过程 ． ～38 3．4小结 ．．40 第4章基于病毒自组装过程的双量子点标记策略 41 4．1前言 。41 4．2实验部分 42 4．2．1实验仪器 42 4．2．2 HEp．2细胞培养 ．43 万方数据 4．2．3 4．2．3 RSV的扩增 ．43 4．2．4基因探针QDs-MB的制备 ． 43 4．2．5病毒基因组的量子点标记 43 4．2．6双色量子点标记病毒制备 43 4．2．7病毒滴度分析 44 4．2．8活细胞实时成像监测病毒侵染动态 ．44 4．3结果与讨论 ．．44 4．3．1基因探针构建与表征 44 4．3．2基因探针对病毒核酸的标记与表征 46 4．3．3基因探针标记病毒用于病毒核酸侵染行为成像 47 4．3．4双量子点标记病毒的制备及感染力测定 49 4．4小结 ．50 第5章实时示踪量子点标记的呼吸道合胞病毒在活细胞内的动态输运途径 。51 5．1前言 ．51 5．2实验部分 。52 5．2．1实验仪器 52 5．2．2 HEp．2细胞培养 。52 5．2．3 I峪V的扩增 ．52 5．2．4原位标记病毒的制备 52 5．2．5活细胞实时成像监测病毒侵染动态 ．52 5．2．6药物抑制实验 53 5．3结果与讨论 53 5．3．1病毒侵染过程的长时间成像 53 5．3．2 RSV通过小窝蛋白朋旨筏介导的内吞途径进入细胞 53 5．3．3 RSV侵染依赖于细胞骨架 ． 56 5．3．4单颗粒示踪技术用于RSV侵染行为研究 58 5．3．5病毒在内质网积累 58 5．3．6呼吸道合胞病毒侵染机理研究 ．： 59 5．4小结 ．60 第6章全文总结与展望 ．．61 万方数据 6．1全文总结 6．1全文总结 61 6．1．1主要结论 61 6．1．2主要创新点 62 6．2前景展望 ． ．．63 6．2．1优良的无机纳米荧光材料的开发 63 6．2．2纳米级分辨率光学成像技术的开发及应用 ． 6