十字孢碱产生菌优化及其衍生物合成研究-药物化学专业毕业论文.docxVIP

十字孢碱产生菌优化及其衍生物合成研究公 十字孢碱产生菌优化及其衍生物合成研究 公 辩委三』盎2 2，-哆7 口 辩委员会成员签字： 帮黏 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：‘正 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后 适用本授权书) 学位做储躲蕾k裤弓 新粹夕护 签字日期：加f1年b月Z R 签字同期：劢，1年房县同 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地址： 邮编 第一节十字孢碱产生菌的筛选 第一节十字孢碱产生菌的筛选 4 第二节十字孢碱产生菌发酵条件探索 9 第三节十字孢碱高产菌株的选育 ．．1 3 第四节十字孢碱代谢调控研究 一20 第五节混合培养次生代谢产物研究 ．．28 第六节突变株次生代谢产物研究 一48 第二章十字孢碱衍生物的合成及活性研究 一68 第一节立体依据 一69 第二节 目标化合物的设计 一69 第三节结果与分析 一70 第四节活性研究 74 第五节小结 ．．74 第六节实验部分 ．．75 第三章综述一天然来源吲哚咔唑生物碱研究进展 一113 参考文献 129 结语和创新点 134 在学期间发表的学术论文与研究成果 135 附图 ．．1 36 十字摘 十字 摘 要 吲哚咔唑类生物碱由于其独特的结构和良好的生物活性引起了许多有机化 学家和药物学家浓厚的兴趣和热切的关注，其中以十字孢碱(staurosporine，ST) 为代表的衍生物更是由于其强的蛋白激酶C(PKC)抑制活性吸引了众多研究者的 目光。本文从十字孢碱的产生菌株出发，开展了一系列的研究工作。研究内容主 要有：十字孢碱产生菌的优化——产生菌的筛选，高产菌株的选育，代谢调控研 究，混合培养对次生代谢产物的影响以及突变高产株十字孢碱类似物的研究；另 外，对高产菌株规模发酵，建立了十字孢碱的提取纯化方法，并对获得的十字孢 碱进行了衍生物合成工作，寻找新的活性高、毒副作用小的蛋白激酶C抑制剂。 实验室保藏的放线菌株分别来自青岛胶州湾的海泥、青岛东风盐场的盐池底 泥，从中进行广泛的筛选，获得了3株产生十字孢碱的链霉菌，分别是S痧日历aP 007、S arenae Z4007、S rubrolavendulae THW．12。对这3株的十字孢碱的产量 进行定量分析，发现产量较低，均在ll-tg／ml左右。因此开展了高产菌株的选育 工作，采用常规的理化因子诱变，通过简便有效的紫外和亚硝基胍进行复合诱变， 从菌株S fradiae 007中得到3株高产突变株：＆fradiae M297、＆fradiae M301、 S加坊ae M315，其中S肛劢口P M315发酵效价由原来的1．02烬．mL-l提高到9．06 llg·mL一，提高了8倍，突变株经过稳定性试验考察，性能稳定。 为了提高菌株的发酵效价，我们还开展了代谢调控和混合培养研究。期望通 过添加代谢前体、酶抑制剂以及竞争性生长因子等诱发新的次生代谢途径。初步 研究了五种常见甲基酶抑制剂对十字孢碱产生菌的影响，包括D．甲硫氨酸、D， L．乙硫氨酸、S．腺苷．L．高半胱氨酸、西奈芬净；发现在培养时加入甲基化酶抑制 西奈芬净，可使THW．12产生去甲基十字孢碱，但是产量较低。通过桐花树根部 的内生真菌Penicillium citrinum WC29．5与链酶菌S Fradiae 007的混合培养，考 察了混合培养对次生代谢产物的影响，获得了10个化合物(1．10)，首次确定了 化合物6的绝对构型；细胞毒活性评价表明，化合物6对A549及HL一60细胞IC50 值分别是0．9、0．8 pM。混合培养的次级代谢产物与纯培养发生了很大的变化， 虽然没有提高十字孢碱的产量，但是生成了不同于纯培养的活性次生代谢产物， 为以后进一步研究混合培养积累了经验。 突变株M315经过发酵条件优化，进行大发酵(250L)。我们对其发酵产物 进行追踪分离，建立了十字孢碱(19)的提取纯化方法，同时还获得了9个其它 吲哚咔畔类生物碱，其中化合物(11．13)为新化合物j其结构特点是在十字孢 十字孢碱产生菌优化及其衍生物合成研究碱的4N上出现了取代基，化合物11出现了氰基，而12和13则分别在该位置 十字孢碱产生菌优化及其衍生物合成研究 碱的4N上出现了取代基，化合物11出现