课件：七细胞融合与体细胞杂交.pptVIP

3 物理法 电融合诱导法（Electrofusion）：利用电场来诱导细胞彼此连接 成串，再施加瞬间强脉冲促使质膜发生可逆性电击穿，促进细胞融 合的技术。 原理：在直流电脉冲的刺激下，细胞膜或原生质体质膜表面的电荷 和氧化还原电位发生改变，使异种细胞或原生质体粘合并发生质膜 瞬间破裂，进而连接，直到闭和成完整的膜形成融合体。 优点：融合率高、重复性与可控制性强。 缺点：可能会造成不可恢复的细胞损伤。 棉花细胞电融合 BLS细胞融合仪 （1）聚集：在直流电脉冲 的诱导下，极化产生偶极子 ，彼此靠近，定向排列成串 球状。 （2）细胞膜融合：在直流 电脉冲的诱导下，原生质体 膜两侧产生电势，正负电荷 相吸，细胞膜变薄，触发膜 的穿孔（质膜瞬间破裂）。 （3）异核体：膜之间形成 通道，细胞质等得以交换、 融合。 （4）融合细胞：细胞核融 合。 细胞融合举例2 ——薄荷的电诱导融合 亲本：E33、E47两个薄荷亲本原生质体（5-9×105） ，0.7M山梨醇。 仪器：Eppendorf电转仪、融合杯（-250微升，-50微 升） 观察：DAPI染色：4，6-联脒-2-苯基吲哚是一种常用 的荧光染料，与DNA的双链紧密结合。结合后产生的 荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好 UV（紫外光）的激发波长正好是356nm。染色标记细 胞核的位置。 参数： 电压：1.5-3V，超过2V破裂，选1.5V。 脉冲电压：0-300V。 脉冲时间：30-60S，每次增加10S，40S最佳。 融 合 率 达 到 16-27%， 原生质体存 活率97% 六 融合细胞筛选 因融合的随机性而成为细胞融合的关键而必需 的技术 1筛选的原因与必要性 细胞融合是一个随机的物理过程，经融合后细胞 将以多种形式出现，需要通过培养和筛选，除去 不需要的细胞，分离出需要的杂种细胞，从而解 决融合细胞的选择问题。 问 题 ：A 与B 融 合过程中，你能预见有哪些 形式的细胞吗？ A-B，A-A，B-B。 A-A-A，B-B-B，A-A-B,B-B-A等多聚体。 未融合的A，B。 2杂种细胞筛选方法 （1）细胞形态大小差异 （2）选择性培养基筛选法：利用原生质体对培养 基成分要求与反应的差异选择杂种细胞的方法。 例如：利用抗性标记、酶缺陷型、激素需求差异 等。亲本原生质体生长要求外源激素，而有的杂 种细胞由于双亲互补作用会产生内激素，从而使 杂种细胞能在无激素的培养基上生长。 （3）再生后杂种与亲本形态、性质差异 细胞融合 例子3： 利用抗性标记进行的融合细胞筛选 七 细胞融合的应用 植物：体细胞杂交培育新品种 动物：单克隆抗体生产（动物细胞生物制药讲授） 第 二 部 分 体细胞杂交 Somatic cell hybridization * 第七章 细胞融合与体细胞杂交 酸酸 甜甜 才是 生活！细胞工程技 术 可以 改变 生活！ 杂交 1.通过不同的基因型的个体之间的交配而取得某些双亲基因重 新组合的个体的方法。2.两条单链DNA或RNA的碱基配对。 杂交优势：两个遗传基础不同的植物或动物进行杂交，其杂 交后代所表现出的各种性状均优于杂交双亲，比如抗逆性强 、早熟高产、品质优良等。 一般情况下，通过生殖细胞相互融合而达到这一目的过程称 为杂交。较多的是种间、种内杂交。 由体细胞相互融合达到这一结果的过程称为体细胞杂交。 部分野生品种的块茎、果实虽不能 食用，但它们的植株具有较强的抗 病虫害、抗盐碱性和耐寒能力。因 此，用野生马铃薯和番茄分别与马 铃薯、番茄作物杂交，培育出了生 存能力较强的杂交系植物。 杂交玉米等杂交植物比它们的亲本 更为健壮，产量更高。 杂交拟南芥（中间）比其亲 本（左和右）要大 《自然》（Nature）2008年11月23 日：中美科学家近日研究发现杂交 植物比其亲本生长更大更好的原因 ：负责光合作用和淀粉代谢的基因 在白天要更为活跃。 骡子：雄驴和雌马交配所产的杂 种叫驴骡。雌驴和雄马交配所产 的杂种叫马骡。 狼狗：狗与狼的杂交后代。 杂交斑马：由斑马和马科动物杂 交产物 狮虎：狮子和老虎的杂交产物。 豹狮：美洲豹与狮子的后代。 不亲和性 不亲和性：在有性生殖过程中，由于生物个体的细胞或组织水 平上的不协调而使受精或接合不能正常进行，或是受精后不能 产生后代的现象。例如：生殖细胞不能融合，或受精卵不能发 育，或子代无繁殖能力等。 是双亲个体间基因型的不协调或是染色体组非同源性在生殖生 理表型上的一种反映。不亲和性是稳定物种的重要机理之一。 种间不亲和性：异种、异属生物个体之间的生殖不亲和现象常 由染色体组的不同所造成。一般地说，越是远缘则不亲和性越 高，直到完全不能受精。 种内不亲和性