课件：五细胞融合与体细胞杂交.ppt

3 物理法 电融合诱导法（Electrofusion）：利用电场来诱导细胞彼此连接成串，再施加瞬间强脉冲促使质膜发生可逆性电击穿，促进细胞融合的技术。 原理：在直流电脉冲的刺激下，细胞膜或原生质体质膜表面的电荷和氧化还原电位发生改变，使异种细胞或原生质体粘合并发生质膜瞬间破裂，进而连接，直到闭和成完整的膜形成融合体。 优点：融合率高、重复性与可控制性强。 缺点：可能会造成不可恢复的细胞损伤。 棉花细胞电融合 （1）聚集：在直流电脉冲的诱导下，极化产生偶极子，彼此靠近，定向排列成串球状。 （2）细胞膜融合：在直流电脉冲的诱导下，原生质体膜两侧产生电势，正负电荷相吸，细胞膜变薄，触发膜的穿孔（质膜瞬间破裂）。 （3）异核体：膜之间形成通道，细胞质等得以交换、融合。 （4）融合细胞：细胞核融合。 BLS细胞融合仪 细胞融合 举例2—薄荷的电诱导融合 亲本：E33、E47两个薄荷亲本原生质体（5-9×105），0.7M山梨醇。 仪器：Eppendorf电转仪、融合杯（-250微升，-50微升） 观察：DAPI染色：4，6-联脒-2-苯基吲哚是一种常用的荧光染料，与DNA的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好UV（紫外光）的激发波长正好是356nm。染色标记细胞核的位置。 参数： 电压：1.5-3V，超过2V破裂，选1.5V。 脉冲电压：0-300V。 脉冲时间：30-60S，每次增加10S，40S最佳。 融合率达到16-27%， 原生质体存活率97% 1筛选的原因与必要性 细胞融合是一个随机的物理过程，经融合后细胞将以多种形式出现，需要通过培养和筛选，除去不需要的细胞，分离出需要的杂种细胞，从而解决融合细胞的选择问题。 问题：A与B融合过程中，你能预见有哪些形式的细胞吗？ A-B，A-A，B-B。 A-A-A，B-B-B，A-A-B,B-B-A等多聚体。 未融合的A，B。 六 融合细胞筛选 2杂种细胞筛选方法 （1）细胞形态大小差异 （2）选择性培养基筛选法：利用原生质体对培养基成分要求与反应的差异选择杂种细胞的方法。 例如：利用抗性标记、酶缺陷型、激素需求差异等。亲本原生质体生长要求外源激素，而有的杂种细胞由于双亲互补作用会产生内激素，从而使杂种细胞能在无激素的培养基上生长。 （3）再生后杂种与亲本形态、性质差异 异硫氰酸荧光素（FITC）和 异硫氰酸罗丹明（RITC） 分别发出绿色和红色 ◆ 荧光染料法 两个亲本原生质体在融合前用能发不同颜色荧光 的荧光染料进行染色。 细胞分类器辨别和收集发两种荧光的异核体。 但仪器价格昂贵，不常用。 细胞融合 例子3：利用抗性标记进行的融合细胞筛选 七 细胞融合的应用 植物：体细胞杂交培育新品种 动物：单克隆抗体生产（动物细胞生物制药讲授） 一 体细胞杂交育种的意义 1克服有性不亲和性，实现远源遗传重组。 2问题：与基因工程改造相比有什么优点？ 植物的抗逆性多为多基因控制，因此易于实现多基因控制性状。 第二节 体细胞杂交及其在育种中的应用 3、细胞质遗传：由胞质遗传物质引起的遗传现象 （又称非染色体遗传）。 二 技术路线 关键技术： 细胞融合、组织培养 子4 例子 ：属间体细胞杂交 三 植物新品种培育解析 油菜属于十字花科芸薹属 紫罗兰属于十字花科紫罗兰属 结果与讨论 KM8P主要用于原生质体培养，其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，呼吸代谢中的主要有机酸。 杂种植物的鉴定 本节小结： 细胞融合：原理、方法、关键环节 体细胞杂交育种：克服有性不亲和性，实现远源遗 传重组；多基因控制性状；细胞质遗传。 谢 谢！ 第五章 细胞融合与体细胞杂交 杂 交 1.通过不同的基因型的个体之间的交配而取得某些双亲基因重新组合的个体的方法。 2.两条单链DNA或RNA的碱基配对。 杂交优势：性状均优于杂交双亲。 一般情况下，通过生殖细胞相互融合而达到这一目的过程称为杂交。较多的是种间、种内杂交。 由体细胞相互融合达到这一结果的过程称为体细胞杂交。 部分野生品种的块茎、果实虽不能食用，但它们的植株具有较强的抗病虫害、抗盐碱性和耐寒能力。因此，用野生马铃薯和番茄分别与马铃薯、番茄作物杂交，培育出了生存能力较强的杂交系植物。 杂交玉米等杂交植物比它们的亲本 更为健壮，产量更高。 杂交拟南芥（中间）比其亲本（左和右）要大 《自然》（Nature）2008年11月23日：中美科学家近日研究发现杂交植物比其亲本生长更大更好的原因：负责光合作用和淀粉代谢的基因在白天要更为活跃。 骡子：雄驴和雌马交配所产的杂种叫驴骡。雌驴和雄马交配所产的杂种叫马骡。 狼狗：狗与狼的杂交后代。 杂交斑马：由斑马和马科动物杂交产物 狮虎：狮子和老