利用AFLP分子标记分析山杏的遗传多样性-果树生物技术专业毕业论文.docxVIP

摘要山杏(Armeniaca 摘要 山杏(Armeniaca sibirica(L．)I．am．)，蔷薇科，李亚科，杏属，通常为落叶灌木 或乔木，耐寒、耐旱、耐瘠薄等，杏仁营养丰富，具有很高的经济、药用价值，叶、 花、树皮、树根也均可入药。主要分布于河北、辽宁及内蒙古等地，作为防风固沙的 优势树种。过去对山杏的研究主要集中在栽培、嫁接技术等方面，而选育种、资源分 类等方面的研究较少，本试验在张家口市赤城县及承德市丰宁满族自治区进行丰产、 晚花及其他特异类型初选的基础上，结合表型性状，利用AFLP分子标记技术对初选 种质进行了分类和遗传关系分析，为山杏种内分类、种质特性和遗传改良等研究提供 理论依据。主要结果如下： 1．确定了适于AFLP分析的山杏基因组DNA的提取方法(改良CTAB法)，其 提取液成分为：基本提取液(100mmol／L Tris．HCI，20mmoI／LEDTA，1．4mol／L NaCI， 2％CTAB)中添加I％PVP-40、1％Ve、10mmol／LNa2S205和2％p．巯基乙醇等防酚抗 氧化物质。粗提后的DNA经RNase酶除去RNA，苯酚／氯仿抽提一次，氯仿／异戊醇 抽提一次，无水乙醇沉淀，得到了RNA去除彻底、纯度高、质量好的山杏基因组DNA。 2．建立了适于山杏分析的AFLP银染技术体系：采用由稀有碱基切点酶MseI和 常见碱基切点酶EcoRI同时进行酶切，MseI和EeoRl的用量各为3U，酶切时间以 37C下酶切4小时为最佳；加入接头后，37℃连接lob以上(或过夜)；连接产物稀释 10倍后进行预扩增；预扩增产物稀释lO倍后再进行选择性扩增；加lOlaL Loading buffer，95℃变性10min，立即冰浴；在6％变性聚丙烯酞胺凝胶上进行电泳分析；银 染法检测PCR产物。 3．从“对引物组合中筛选出10对多态性高、条带清晰、分布均匀的引物组合 用于材料分析，共扩增出可统计条带470条，平均每对引物扩增带数为47条。其中 多态性条带274条，占总带数的58．3％。 4．应用NTSYSpe2．1 0软件计算相似系数介于0．68--0．83，并应用UPGMA法将 22份山杏供试材料在简单相似系数为0．72处分成6个类群，进而分析了各种质问的 亲缘关系，为应用AFLP分子标记对山杏种质资源进行分类及亲缘关系等方面的研究 奠定了基础。 关键词：山杏； AFLP；树状图； 遗传多样性 Using Using AFLP Markers to Analyse Genetic Diversity in Armeniaca sibirica OL)Lam． Major：．Pomology Master Graduate：Wang Lei Supervisor：．GE Huibo Abstract Armeniaca sibirica(L．)Lam．is Rosaceae，Prunoideae，Armeniaca Mill，usually deciduous arbor or shrub．It has has these characteristies of tolerance to cold，drought， infertile，and SO on．Almond is high of nutrition，has highly economic and medical value． Leaves，flowers，bark and roots can be used as medicine．It is mainly distributed in Hebei， Liaoning and Inner Mongolia，as one of the dominant species of breakwind．In the past the studies on A．sibirica(L．)Lam．were being mostly concentrated on the cultivation，graft and SO on，less concentrated on seed selection，breeding，and resource classifiction．In the county of Chicheng,Zhangjiakou，it Was primarily selected that high-yield，late-flower and other specific types．Classification and remembership of genealogy were analyzed using RAPD markers with phenotypic character,whic