鲤嗜水气单胞菌弱毒株筛选及免疫原性评价-水产学、水产养殖专业毕业论文.docxVIP

摘要嗜水气单胞菌(Aeromonas 摘要 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是一种革兰氏阴性细菌，可以引起鲤(Cyprinus carpio)、鲫(Carassius aumtus)等多种淡水养殖鱼类细菌性败血症的爆发，对渔业生 产造成严重的经济损失。目前，我国主要使用化学药物对鱼病进行防控，大量化学药物 的使用会导致药物残留，破坏生态环境，并且为超级细菌的产生创造条件，所以使用疫 苗对鱼病进行免疫防控是未来的发展趋势。然而我国尚未普及以疫苗为主的鱼病防控方 法。原因主要有两方面：首先由于现阶段研制的鱼用疫苗免疫效果不稳定；另一方面疫 苗导入方法不够高效，难以满足生产需求。所以，研发高效稳定，操作简便的鱼用疫苗 是现阶段鱼类疾病防控研究的重点。本论文针对由嗜水气单胞菌引起的传染性疾病，开 展了鲤嗜水气单胞菌弱毒疫苗的研制及不同导入途径的疫苗免疫效果评价。旨在找到一 种可广泛应用于水产养殖业，高效稳定、操作简便的嗜水气单胞菌弱毒疫苗，预防由嗜 水气单胞菌引起的细菌性败血症，并为鱼用疫苗免疫效果评价标准的建立提供参考。本 论文主要内容如下： 1．利福平筛选嗜水气单胞菌弱毒菌株 以采自新乡本地的高致病性鲤嗜水气单胞菌菌株XXl为研究对象，通过利福平梯 度浓度筛选，获得一株毒性明显降低，以正常攻毒剂量未导致鲤发病的弱毒菌株，命名 为XXlLA菌株。经测定，XXlLA的半数致死量(LD50)为4．5×109 CFU／ml是XXl 半数致死量的200倍。用100 lal浓度为106 CFU／ml的XXlLA进行攻毒实验，鲤并未出 现嗜水气单胞菌感染症状及死亡现象，体外连续培养及体内多次攻毒和回收实验过程 中，XXlLA毒性无复壮现象，表现出良好的稳定性。实验结果表明，经利福平筛选获 得的嗜水气单胞菌弱毒菌株XXlLA具有毒性大幅减弱、无致病性及稳定性高等特点， 可以作为制备嗜水气单胞菌弱毒疫苗的候选菌株。 2．嗜水气单胞菌弱毒疫苗XXILA免疫效果评价 本论文采用相对免疫保护率(RPS)、血清特异性抗体效价、血清溶菌酶活性和免 疫相关基因表达水平等指标，对XXlLA的免疫效果进行评价，并与传统的福尔马林灭 活嗜水气单胞菌疫苗的免疫效果进行比较，结果显示：免疫14 d后XXlLA组的相对免 疫保护率(83．7％)显著高于灭活疫苗组(37．2％)(氏0．05)：XXlLA和灭活疫苗组血 万方数据 清特异性抗体效价在免疫28 清特异性抗体效价在免疫28 d内逐渐升高，并在免疫14 d后显著高于对照组，XXlLA组 在免疫28 d后，血清特异性抗体效价与灭活疫苗组和对照组间均存在显著性差异 (尸O．05)；；免疫相关基因儿．，夕、儿．』D和lgM在肝脏和脾脏中的表达量在免疫后均有 上调；但是，对于血清中溶菌酶活性而言，实验组与对照组之间无显著性差异。研究结 果表明，XXlLA对鲤呈现出较好的免疫保护效果。 3．不同方法导入弱毒疫苗XXILA的免疫效果比较 本论文采用浸泡和腹腔注射两种方法，导入嗜水气单胞菌弱毒疫苗XXlLA。分别 从血清溶菌酶活性，血清特异性抗体凝集效价和相对免疫保护率三个方面评价两种导入 方法的免疫效果。实验结果表明，血清溶菌酶活性在疫苗导入后7 d和14 d时，浸泡组 和注射组显著高于对照组(p0．05)；血清特异性抗体凝集效价在免疫后14-28 d，浸泡 组和注射组均显著高于对照组(P0．05)，浸泡组与注射组之间无显著性差异；注射组和 浸泡组的相对免疫保护率分别达到78．85％和80．77％，两种疫苗导入方法均呈现出良好 的免疫保护效果。实验结果表明，弱毒疫苗XXlLA采用浸泡法导入鲤鱼种后，可以刺 激机体产生非特异性和特异性免疫应答，能够有效防控由嗜水气单胞菌引发的细菌性败 血症，免疫保护效果与注射法基本一致，为简化实际生产中疫苗导入方法提供了理论依 据。 关键词：弱毒疫苗；嗜水气单胞菌：利福平；鲤鱼；浸泡免疫 万方数据 AB AB STRACT Aeromonas hydrophila，as strong Gram-negative bacterium，call infect wide range of freshwater fish，including common carp Cyprinus carpio，and the huge economic loss．To create the effective vaccine is the best way to control the outbreak of the disease caused by A．hydrophila．Fish vaccine development has become hot topic