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黄秋葵多糖的体外抗氧化活性研究 摘要：以遵义黄秋葵为对象，制备了黄秋葵多糖，研究了英多糖成 分的体外抗氧化活性。结果表明：黄秋葵多糖对DPPII、轻基自由基(？()11) 和超氧负离子(0-2?)均具有良好的清除作用，与Fe2+有较强的螯合能力, 并但黄秋葵多糖的抗氧化作用呈现一定的浓度依赖性。 关键词：黄秋葵；多糖；抗氧化活性 中图分类号：R285 文献标识码：A文章编号：1674-9944 (2017) 6-0194-02 1引言 黄秋葵(Abelmoschus esculentus Moench)属锦葵科秋葵属，主要 分布于热带、亚热带及温带，在我国贵州、湖北、湖南等地栽培面积较广, 有蔬菜王的称呼，经济及食用价值较高［1, 2］。现代药理学研究表明，黄 秋葵在养胃、抗疲劳、抗肿瘤、保护心血管及免疫调节等方面具有较好的 活性［3?5］。多糖作为植物中的一种重要生物大分子，具有抗氧化、免疫 调节、抗肿瘤、抗病毒等多种功能［6-8］,木文联合利用4种方法对黄秋 葵多糖的体外抗氧化作用进行了研究，研究结果将为黄秋葵的综合开发利 用提供理论支撑。 2材料与方法 2. 1材料和试剂 从市场上采购黄秋葵，烘干至恒重；抗坏血酸、磷酸二氢钠、磷酸氢 二钠、氯化钠等常规化学试剂购于北京化工厂；辣根过氧化物酶（HRPaso）、 1, 1-二苯基-2-三硝基苯月井（DPPH）、氯化硝基四氮呼（NBT）等购于Sigmao 2.2仪器与设备 可见分光光度计（723型），上海光谱;电子分析天平（SL3001N）,上 海民桥；冷冻干燥器，北京博医康；电热恒温水浴锅，北京泰泽瑞达。 2. 3黄秋葵多糖的制备 称取干燥的黄秋葵500 g,置于装有8 L蒸憎水的容器中，100 °C煮 提4 h,过滤；重复煮提一次，过滤，合并二次的滤液。于65 °C将多糖 提取液浓缩至约700 mL, 4500 r/min离心15 min,收集上清液并加入4 倍体积的95%乙醇，静置过夜。次日，4500 r/min离心15 min,收集沉淀 并冻干。将冻干物复溶于700 mL的蒸憾水中，并向该溶液中加入除蛋白 试剂（氯仿：正丁醇=4： 1） 200 mL,剧烈振荡2 h后，于4500 r/min离 心15 min,收集水层，重复2次后，将上清溶液冻干，即得黄秋葵多糖。 2.4黄秋葵多糖的糖含量、糖醛酸含量及蛋白质含量测定 分别采用苯酚-硫酸法、间疑基联苯法和考马斯亮蓝法分析多糖屮的 糖、糖醛酸和蛋白质含量［9］。 5黄秋葵多糖的抗氧化活性测定 2. 5. 1对DPPH的清除能力 将黄秋葵多糖溶于蒸谓水中，配成系列浓度的溶液（0.25?4.0 mg/mL）o上述多糖溶液各取4 mL与1 mL DPPH甲醇溶液（0. 1 M）混合， 混匀并避光反应20 mine以蒸憾水为空白对照，抗坏血酸为阳性对照。DPPH 清除率二（1-A黄秋葵多糖/A蒸倔水）X 100%,其中A黄秋葵多糖和A 蒸憾水为各溶液在517 nm处的吸光值［10］。 2.5.2对耗基自由基(?OH)的清除能力 将黄秋葵多糖溶于蒸馆水中，配成系列浓度的溶液(0.25?4.0 mg/mL)o上述多糖溶液各取0.1 inL,与0. 4 mL磷酸盐缓冲液(0. 05 M, pH=7.5),乙二胺四乙酸溶液(0. 001 M)、H202 (0.01 M),抗坏血酸溶液 (0. 002 M),脱氧核糖溶液(0. 06 M), FeC13 溶液(0. 001 M)各 0.1 mL 混合，于37 ° C孵育1 ho向溶液中继续加入TFA溶液(10%)和1.0 mL 硫代巴比妥酸溶液(1%)各1.0 mL,于100 ° C孵育15 mino轻基自由 基(？()11)清除率二(1-A黄秋葵多糖/A蒸储水)X 100%,其中A黄秋葵 多糖和A蒸憾水为各溶液在532 nm处的吸光值［11］。 2.5.3对超氧负离子(0-2?)的清除能力 将黄秋葵多糖溶于蒸馅水中，配成系列浓度的溶液(0.25?4.0 mg/mL)o上述多糖溶液各取1 mL,加入氯化硝基四氮哇(300 uM)、还原 型烟酰胺腺瞟吟二核昔酸(936 uM)、吩嗪硫酸二甲酯(120 uM)各1讥 混合，于25 °C孵育5 mino超氧负离子(0-2?)清除率二(1-A黄秋葵多 糖/A蒸憾水)X 100%,其中A黄秋葵多糖和A蒸憾水为各溶液在560 run 处的吸光值［12］。 2. 5.4与Fe2+的螯合能力 将黄秋葵多糖溶于蒸谓水中，配成系列浓度的溶液(0.25?4.0 mg/mL)o上述多糖溶液各取1 mL,与0.5 mL FeC12 (2仙)、0. 2 mL菲咯 嗪溶液(2mM)混合，于25 °C孵育15 min。Fc2+螯合率二(1-A黄秋葵多 糖/A蒸憎水)X 10